论文摘要
转基因技术可将具有优良性状的目的基因导入受体植物基因组中,从而使得许多植物的遗传性状得到改良。随着植物生物技术的发展,转基因技术以其巨大的应用价值,正逐步成为非常重要的育种手段。但是由于在转化过程中往往只有少数植物细胞发生转化,吸收并将外源DNA整合到受体植物基因组中,由于大多数细胞并未发生转化,因此非常有必要用标记基因来筛选含目的基因的转化体。这些转化后的受体植物因有特定的选择性标记,可以方便的得以识别和鉴定。然而一但获得转化植物,标记基因就变得不再有用,但却长期存在于植物体内并发生表达。由于人们日益关心转基因植物中标记基因的安全性问题,这些问题包括:（1）对植物的生长、发育、分化带来的负面影响;（2）许多选择标记基因尚不确定是否会对环境中其它植物产生影响及对人类产生毒性和过敏;（3）重复多个基因转化以增加优良性状转基因数目时若使用相同的标记基因将十分困难。为了解决这些问题,近年来已有报道通过许多方法来获得无标记的转基因植物。这种无标记的转基因技术最终将去除转化体中的标记基因序列。因此无标记基因的转化技术已越来越多的受到人们的关注。由于具有时间、组织和位点特异性,Cre重组酶介导的DNA重组已成为获得无标记转基因植物的一个重要工具。Cre/1oxP位点特异性重组系统来源于噬菌体P1,由两部分组成:重组酶Cre和它的识别位点1oxP。Cre重组酶介导重组事件导致两个相邻的同向1oxP位点之间的DNA片段被删除。本实验利用植物表达载体pRAL-MCS构建一个新型实用的可选择性去除标记基因的植物表达载体和RNAi载体,所有的选择标记基因（包括组成型启动子pAdh1启动的GFP和CaMV 35S启动的BAR基因）插入两个同向的1oxP位点之间,通过热激诱导,位于AtHsp18.2启动子下游的Cre/1oxP重组酶系统将被激活并诱导发生重组反应,所有选择标记基因和重组酶Cre本身的序列将被切除。上述植物表达载体和RNAi载体可广泛应用于培育无选择标记的转基因植物。
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标签：植物表达载体论文; 无标记转基因植物论文; 位点特异性重组论文; 系统论文;