Ucn3及其受体CRFR2在肠易激综合征大鼠模型肠神经系统中的表达

论文摘要

研究背景与目的：肠易激综合征（Irritable Bowel Syndrome, IBS）是一种以腹痛或腹部不适同时伴有排便习惯改变为特征的功能性肠道疾病，须经检查排除可引起这些症状的器质性疾病。因其发病率升高，且治疗困难而逐渐引起重视，但其病因和发病机制仍未完全明了。目前认为，肠易激综合征（IBS）的病理生理学基础主要是胃肠动力学异常以及内脏高敏感性，其中应激能够引起内脏高敏感性的形成。肠易激综合征（IBS）作为最常见的功能性疾病，与应激有着极为密切的关系，促肾上腺皮质激素释放因子（Corticotrophin Releasing Factor, CRF）家族作为应激反应中的关键调节因子，主要是通过控制下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）发挥作用，调动机体各系统以应答应激刺激，调节内分泌、自主神经、免疫和行为反应。尿皮质素3（urocortin3, Ucn3）是最新发现的CRF家族成员，对促肾上腺皮质释放因子受体2（corticotrophin-releasing factor receptor, CRFR2）具有高亲和性，因而被认为是CRFR2的内源配体。Ucn3及其受体CRFR2是否参与对肠易激综合征（IBS）肠道应激的调节，以及在肠易激综合症患者肠道的表达是否有改变还不清楚。本实验旨在建立肠易激综合征（IBS）模型，并通过免疫荧光法和Real-time PCR法检测Ucn3、CRFR2在结肠的表达情况，进一步探讨其表达变化与肠易激综合征发病机制的联系，为进一步阐明Ucn3、CRFR2在肠易激综合征发病中的作用提供新的证据。方法：将30只160180g的雄性wistar大鼠随机分为模型组（在慢性应激基础上给予急性束缚）和正常对照组两组建模。采用体重变化、排便粒数、敞箱行为评分、蔗糖水偏嗜度和直肠扩张腹壁收缩最小阈值（threshold value ofabdominal construction, TVAC）评价动物模型，并通过结肠苏木素-伊红染色（HE染色）观察两组大鼠结肠组织形态学改变。动物模型建成后留取大鼠结肠组织，采用免疫荧光法检测Ucn3及其受体CRFR2的定位表达，Real-time PCR法检测各组大鼠结肠中Ucn3及其受体CRFR2的表达量的变化。结果：建模后，模型组大鼠体重较正常对照组减轻（P<0.05）。给予应激刺激后，模型组大鼠排便粒数明显增加，应激后7d、14d、21d、35d时，模型组与对照组比较差异明显（P<0.05）。给予应激刺激后的早期（9d和18d），模型组大鼠敞箱行为评分比对照组略有降低，但二者间没有统计学差异，至应激27d时，模型组大鼠敞箱行为评分显著低于对照组（P<0.05）。给予大鼠应激刺激，其兴趣逐渐缺失，其蔗糖水偏嗜度降低，造模28d时，模型组与正常对照组相比差异有统计学意义（P<0.05），造模35d时给予急性应激后，模型组与正常对照组相比差异有显著性（P<0.01）。应激后，发现模型组大鼠直肠扩张腹壁收缩最小阈值（TVAC）明显小于对照组，有统计学差异（P<0.05），在0.8、1.2、1.6ml容量扩张时，模型组大鼠腹部收缩次数明显多于对照组（P<0.05）。光镜下应激后模型组大鼠结肠组织形态与对照组比较无明显变化。Ucn3及其受体CRFR2在粘膜下神经丛、肌间神经丛均有表达，主要表达于神经细胞细胞质中，荧光显微镜下Ucn3及其受体CRFR2在粘膜下神经丛的表达呈颗粒状，在肌间神经丛表达呈网格状。Ucn3在两组大鼠结肠中的表达：正常对照组1.11±0.29，模型组3.99±1.59，应激组Ucn3的表达高于对照组（P<0.05）。CRFR2在各组大鼠结肠中的表达：正常对照组1.04±0.22，模型组2.39±0.84，应激组CRFR2的表达高于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：Ucn3及其受体CRFR2在肠易激综合征大鼠结肠中均有表达，且表达量较正常对照组明显升高，说明他们可能在肠易激综合征发病中发挥一定的作用。

论文目录

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• 结论
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• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间撰写的论文