论文摘要
对猪瘟抗体水平检测是制定合理的免疫程序,监测疫苗免疫效果的基础。本研究利用猪瘟病毒（CSFV）免疫优势蛋白E2蛋白具有4个独立的抗原结构域的特点,将E2的免疫活性区域进行原核表达。采用PCR技术,从已构建好的含有E2全长基因的S21质粒中分别扩增出E2蛋白的4个抗原决定域,并克隆入pMAL—p2X载体中,构建了4个原核表达载休E2-abcd/pMAL-p2X、E2-ala2/pMAL-p2X、E2-b/pMAL-p2X和E2-c/pMAL-p2X。通过对四种表达菌的筛选,最后选择BL2l—CodonPlus（DE3）-RP作为受体表达菌。电泳结果显示均获得可溶性表达,目的蛋白的表达量占总蛋白的15%—30%。将重组的目的蛋白进行亲和层析纯化,作为包被抗原,初步建立了枪测猪瘟抗体的间接ELISA方法。实验证明,该方法对标准的CSF阳性及阴性血清的具有良好的敏感性。 猪瘟感染确诊的主要依据是对CSFV的实验室检测。因此,本研究设计了多科探针和引物,初步建立了双重时荧光PCR技术,检测包括CSFV在内的4种可引起繁殖障碍的病毒,即猪瘟病毒（CSFV）,猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）,猪伪狂犬病寿（PRV）、猪细小病毒（PPV）。实验证明,所设计的探针和引物具有良好的特异性。实时荧光PCR检测各种病原的敏感性试验结果显示,检测CSFVcDNA的敏感性达2-8,而nest-PCR的敏感性达29;检测PRSV cDNA的敏感性达2-2,而nest-PCR的敏感性可达25;实时荧光PCR检测PRV的敏感性可达105,而常规PCR方法可达10-4;检测PPV的敏感性达10-6,而常规PCR方法可达104。
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