山药多糖对大鼠盲肠微生物区系和免疫功能的影响

论文摘要

试验一:选择山药多糖（Chinese Yam Polysaccharide,CYP）作为研究对象。采用水煎分段醇沉法,当乙醇终浓度分别为30%、45%、60%和75%时沉淀得到4种山药多糖,期间采用三氯乙酸法去除多糖中蛋白质。用硫酸蒽酮法测得其总多糖含量分别为45.85%、56.24%、90.91%和13.87%。并通过考马斯亮蓝比色法测得4种山药多糖蛋白质含量分别为2.62%、2.71%、2.81%和2.53%。为整个试验提供试验材料。试验二:本试验采用体外发酵技术评价分段醇沉得到的4个山药多糖对SD大鼠盲肠食糜的体外发酵特性和发酵产物的影响,并探讨其用做动物功能性营养调控剂的可行性。选用正常饲喂的SD大鼠,处死后无菌取盲肠食糜作为接种物,分别以试验一所提取的4种山药多糖和葡萄糖为底物进行体外发酵。于不同发酵时间点记录产气量,36 h后检测发酵液pH值、NH3和SCFA含量,并提取发酵液中细菌DNA用以DGGE。结果表明,60%醇沉多糖发酵动力学参数最优,并显著高于其它多糖及培养液对照组（p＜0.05）;45%、60%和75%醇沉多糖组的pH值和NH3含量均极显著低于培养液对照组（p＜0.01）;60%醇沉多糖组的乙酸和丁酸含量均显著高于其它处理组（p＜0.05）,丙酸和异丁酸含量稍低于75%醇沉多糖组,但差异不显著。乙酸、丙酸和丁酸含量与pH值和NH3含量具有显著的相关性（p＜0.05）。通过DGGE,发现60%醇沉多糖组和75%醇沉多糖组具有很高的相似性（91%）,且能较有效的提高特定菌种含量并减少微生物的种类和种群数量方面均显著优于30%、45%醇沉多糖。提示60%和75%醇沉山药多糖是2种理想的可被SD大鼠盲肠微生物利用的碳源,并可改变盲肠微生态区系及其产生的SCFA含量与组成。试验三:本试验旨在研究山药多糖对生长性能和免疫功能的影响。试验以40只平均体重为（87±3）g的SD雄性大鼠为研究对象,随机分为4组:对照组（Ⅰ）,饲喂基础日粮;处理组（Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组）,分别在基础日粮中添加0.25 g/kg、0.5 g/kg和1.0 g/kg 60%醇沉山药多糖。每组10个重复,每个重复1只SD大鼠。预试期7 d,试验期21 d。试验结果表明:（1）两个试验期内0.25g/kg山药多糖添加组在提高SD大鼠日增重方面显著高于对照组（p＜0.05）,试验第三周在降低料重比方面显著高于对照组（p＜0.05）,且随着多糖添加量的提高,SD大鼠生长性能逐渐下降;（2）两个试验期内1.0 g/kg山药多糖添加组的血清IL-2和TNF-α水平均显著高于对照组（p＜0.05）,LDL、TC和TG水平均显著低于对照组（p＜0.05）。随着多糖添加量的提高,血清IL-2和TNF-α水平均逐渐升高,LDL、TC和TG水平逐渐下降。（3）两个试验期内0.25g/kg山药多糖添加组的OD值显著高于对照组（p＜0.05）,随着多糖添加量的提高,OD值逐渐下降;（4）试验第一周0.25 g/kg和0.5g/kg山药多糖添加组盲肠食糜中乙酸和丁酸含量显著高于对照组和1.0 g/kg山药多糖添加组（p＜0.05）,0.25 g/kg山药多糖添加组丙酸含量显著高于其它试验组（p＜0.05）。试验第三周0.25 g/kg山药多糖添加组乙酸含量显著高于其它试验组（p＜0.05）;（4）通过DGGE,发现山药多糖添加组中代表唾液乳酸杆菌和枯草芽孢杆菌的条带亮度高于对照组,且随着试验期的延长,各山药多糖添加组的优势菌群数量增加（吸收度增强）,处理间各重复相似性有所提高。提示0.25g/kg山药多糖添加组可提高SD大鼠生长性能和免疫功能,并可被SD大鼠盲肠微生物利用,改变盲肠微生态区系及其产生的SCFA含量与组成。

论文目录

• 目录
• 摘要
• Abstract
• 缩略语
• 第一章 文献综述
• 1 功能性多糖
• 2 功能性多糖的提取与去杂质
• 2.1 多糖的提取
• 2.2 多糖的去杂质
• 3 功能性多糖含量的测定及纯度检测
• 3.1 功能性多糖含量的测定
• 3.2 功能性多糖纯度检测方法
• 4 功能性多糖的生理功能及机制的研究
• 4.1 功能性多糖对肠道菌群及其产物的影响
• 4.2 功能性多糖对细胞免疫功能的影响
• 5 功能性多糖的其它生理功能
• 5.1 增强巨噬细胞功能
• 5.2 增强NK细胞活性
• 5.3 对抗体生成的影响
• 5.4 可逆转动物的免疫抑制
• 5.5 减少自由基的生成
• 6 影响功能性多糖作用的因素
• 6.1 多糖的物理化学性质
• 6.2 动物自身状况
• 6.3 给药方式和用量
• 7 山药多糖开发与应用研究现状
• 7.1 山药多糖的性质和来源
• 7.2 山药多糖的生物学活性
• 7.3 山药多糖在饲料中的应用前景及展望
• 8 研究目的与意义
• 第二章 四种山药多糖的制备
• 1 材料和方法
• 1.1 试剂和仪器
• 1.2 多糖的提取
• 1.3 样品中多糖含量的测定
• 1.4 样品中蛋白质含量的测定
• 2 结果
• 3 讨论
• 第三章 四种山药多糖组份的体外发酵特性比较研究
• 1 材料与方法
• 1.1 山药多糖制备
• 1.2 试验设计
• 1.3 培养液配制
• 1.4 主要试剂
• 1.5 主要仪器设备
• 1.6 考察指标与测定方法
• 1.7 数据统计与处理
• 2 结果与分析
• 2.1 发酵动力学参数灌胶
• 3含量'>2.2 发酵液的pH值和NH₃含量
• 2.3 发酵液中SCFA含量
• 3和短链脂肪脂肪酸含量的相关性'>2.4 发酵液pH值、NH₃和短链脂肪脂肪酸含量的相关性
• 2.5 山药多糖对SD大鼠盲肠道微生物区系的影响（DGGE凝胶电泳分析）
• 3 讨论
• 第四章 山药多糖对SD大鼠生长性能、盲肠微生物和免疫功能的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 药品
• 1.2 试验设计和试验动物
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器设备
• 1.5 SD大鼠生长性能指标测定
• 1.6 SD大鼠外周血的采集及血清指标测定
• 1.7 SD大鼠盲肠食糜SCFA和pH值的测定
• 1.8 DGGE过程
• 1.9 外周血T淋巴细胞的分离及培养
• 1.10 数据分析
• 2 结果与分析
• 2.1 对生长性能的影响
• 2.2 对血清指标的影响
• 2.3 T-淋巴细胞增殖的动态变化
• 2.4 对盲肠短链脂肪酸含量和pH值的影响
• 2.5 DOGE过程
• 3 讨论
• 3.1 山药多糖对SD大鼠血清指标的影响
• 3.2 山药多糖对SD大鼠血液T-淋巴细胞增殖的影响
• 3.3 山药多糖对SD大鼠盲肠食糜SCFA含量的影响
• 3.4 对SD大鼠盲肠道微生物区系的影响（DGGE凝胶电泳分析）
• 第五章 全文结论
• 第六章 创新和不足
• 1 创新
• 2 不足
• 参考文献
• 致谢
• 附录