复发性流产妇女ACA阳性血清对BeWo细胞发育能力影响及阿司匹林的调节

论文摘要

目的目前,国内把连续2次或2次以上发生在妊娠20周之前的妊娠产物或胎儿丢失（体重≤500g）称为复发性自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA）,文献报道其发生率可高达5%。复发性自然流产的病因复杂,因此其诊断和处理亦存在争议。目前认为导致复发性自然流产的因素包括遗传、解剖、胎盘异常、内分泌、感染、吸烟、嗜酒、环境、精神因素、某些凝血和免疫调节蛋白缺乏等。检出以上任何一种异常一般都可以找到对症治疗的方法,获取不同程度的治疗效果。但仍有约一半的复发性自然流产患者找不到明确的病因。生殖免疫研究显示,自身免疫因素是造成复发性自然流产的原因,某些难以解释的复发性自然流产与自身抗体相关。自身免疫是母体对妊娠产物的反应。与复发性自然流产相关的自身抗体有抗磷脂抗体（APA）、抗核抗体（ANA）、抗甲状腺抗体（ATA）等,其中最常见的是抗心磷脂抗体（ACA）和狼疮抗凝物（LC）。既往认为自身抗体造成流产的病理机制是血管栓塞,因此阿司匹林以其抗凝作用而用于自身抗体阳性的复发性流产患者的治疗。DiSomone曾指出除了血栓形成之外,自身抗体对滋养细胞的直接损害也可能是造成流产的原因。关于这方面的研究并不多。本实验通过对滋养细胞凋亡等细胞发育相关指标的检测,评价抗心磷脂抗体阳性复发性自然流产患者血清对滋养细胞发育的影响及阿司匹林对此的作用。研究方法1.研究对象选取RSA患者8名为研究组,同期既往无不良孕产史,有一胎以上的正常足月分娩史的非孕期健康育龄妇女8名为对照组。2.试验方法2.1标本采集无菌条件下获取研究组和对照组静脉血清,-20℃冻存。2.2 BeWo细胞培养所有实验中,BeWo细胞均分为4组培养,即在不含胎牛血清的ham F-12培养基中分别加入对照组血清、对照组血清加阿司匹林、研究组血清和研究组血清加阿司匹林。其中血清终浓度为10%,阿司匹林终浓度为25ug/ml。2.3滋养细胞发育相关指标的评价四甲基偶氮唑盐比色法（MTT,Metsatalousministerion）检测细胞成活力;酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）测定加入forskolin后培养上清中β-HCG浓度;流式细胞术检测BeWo细胞凋亡相关蛋白M30的表达。结果对照组490nm平均OD值为0.2414±0.0320,β-HCG平均浓度为22.9900±2.2568mIU/ml,M30平均表达为0.7900±0.1786%;研究组较对照组490nmOD值和β-HCG浓度明显减少,M30平均表达明显增多,其平均值分别为0.2061±0.0191,19.4488±1.8132 mIU/ml和4.7868±0.5170%,p＜0.05。对照组加入阿司匹林后,490nm平均OD值为0.2411±0.0327,β-HCG平均浓度为23.2288±2.0581mIU/ml,M30平均表达为0.6325±0.1701%,与加入前相比差异不大,p＞0.05。研究组加入阿司匹林后490nmOD值和β-HCG浓度明显增多,M30平均表达明显减少,平均值分别为0.2369±0.0311,21.5675±1.3338mIU/ml,2.7037±0.8920%,p＜0.05。结论除了致栓塞作用外,抗心磷脂抗体对滋养细胞的发育能力有直接的影响。它可使滋养细胞成活力减低,凋亡增多,滋养细胞分化、融合能力减低,β-HCG分泌减少。阿司匹林在一定程度上能够逆转这一不良影响,提示阿司匹林治疗复发性自然流产的机制除抗凝之外还可能有对滋养细胞发育能力的直接调节。意义本试验研究结果为阿司匹林治疗复发性自然流产提供了进一步的理论依据,同时提示了阿司匹林可能用于胎盘功能不良的研究。在自身免疫型复发性自然流产的治疗中,调节细胞功能的药物也可能会起到一定作用。

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