论文摘要
目的探讨日本血吸虫26 kDa谷胱甘肽-S-转移酶（SjGST）在虫卵阶段的表达、定位和以重组SjGST （rSjGST）为诊断抗原建立金标免疫渗滤法（DIGFA）快速诊断日本血吸虫感染的血清学检测方法。方法从感染日本血吸虫尾蚴42天的兔肝脏中分离虫卵,分别用RT-PCR和Western blotting检测SjGST基因在虫卵阶段的转录和表达;同时用兔肝组织做免疫组化,观察SjGST在虫卵内的分布。采用柠檬酸三钠还原法制备15 nm左右的胶体金,将葡萄球菌A蛋白（SPA）连接到胶体金上制备金标-SPA,作为DIGFA抗原-抗体复合物的检测试剂;从本室构建的pET 28a/SjGST/BL 21菌种中诱导、表达并纯化rSjGST,以rSjGST为抗原采用DIGFA（rSjGST-DIGFA）,对急、慢性日本血吸虫病患者和正常人的血清进行检测,同时用日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）为抗原采用DIGFA（SEA-DIGFA）检测上述血清,比较rSjGST-DIGFA与SEA-DIGFA诊断日本血吸虫病敏感性、特异性和实用性;再用rSjGST-ELISA和SEA-ELISA检测上述血清,比较两者之间敏感性和特异性;同时用rSjGST-DIGFA、SEA-DIGFA、rSjGST-ELISA和SEA-ELISA检测华支睾吸虫和钩虫感染者血清,比较不同抗原和不同方法诊断日本血吸虫病的交叉反应性。结果RT-PCR从日本血吸虫虫卵中扩增出670 bp的基因片断,Western blotting显示在成熟虫卵阶段SjGST的表达;免疫组化显示SjGST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺。从pET 28a/SjGST/BL 21菌种中大量诱导、表达并纯化出rSjGST,SDS-PAGE检测其分子量与理论值一致;以rSjGST为抗原采用DIGFA,经过条件优化,建立了rSjGST-DIGFA诊断日本血吸虫病的方法。rSjGST-DIGFA用于检测急、慢性日本血吸虫病患者血清,与SEA-DIGFA比较,结果显示:用两种抗原检测急性患者血清102例,阳性率分别为93.1 %和98.0 %,敏感性无显著性差异（p>0.05）;用两种抗原检测慢性患者血清207例,阳性率分别为80.7 %和84.1 %,敏感性也无显著性差异（p>0.05）;两种抗原对于140例正常对照者血清检测的假阳性率分别为3.6 %和1.4 %,也无显著性差异（p>0.05）。用rSjGST-ELISA和SEA-ELISA检测上述急性血清,阳性率分别为90.2 %和99.0 %,;检测上述慢性血清阳性率分别为82.1 %和87.4 %,;检测上述正常人血清,假阳性率分别为2.1 %和2.1 %,两种方法对上述三种血清检测的敏感性均无显著性差异（p>0.05）。华支睾吸虫和钩虫交叉反应性分析结果:rSjGST-DIGFA和SEA-DIGFA比较,检测华支睾吸虫感染者血清的交叉反应性分别为14.0 %和8.0 %,差异无显著性（p>0.05）;检测钩虫感染者血清的交叉反应性分别为6.8 %和4.1 %,差异也无显著性（p > 0.05）。rSjGST-ELISA与SEA-ELISA比较:检测华支睾吸虫感染者血清的交叉反应性分别为10.0 %和10.0 %,差异无显著性（p > 0.05）;检测钩虫感染者血清的交叉反应性分别为6.8 %和4.1 %,差异也无显著性（p > 0.05）。结论SjGST主要分布在虫卵内毛蚴两边的侧腺,是SEA的主要组分之一,能诱导宿主产生高滴度的抗体。以rSjGST为抗原,采用DIGFA诊断日本血吸虫病显示出较高的敏感性和特异性,具有实用价值。