骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的实验研究

论文摘要

目的：观察骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对血管性痴呆大鼠神经功能恢复的影响,并探讨其机制。比较立体定向移植与尾静脉移植两种方法的疗效,为血管性痴呆的临床治疗提供有价值的实验依据和方法。方法：1、利用大鼠骨髓,通过密度梯度离心结合贴壁筛选的方法分离、培养BMSCs,并用BrdU标记。2、将Wistar大鼠随机分为以下五组：①正常对照组②假移植组③痴呆模型组④立体定位移植组⑤尾静脉移植组。假移植组、痴呆模型组、立体定位移植组和尾静脉移植组均采用永久结扎双侧颈总动脉制作大鼠血管性痴呆模型。立体定位移植组和尾静脉移植组造模后第7天分别将BMSCs细胞悬液约10μL（约1×106个细胞/μL）通过立体定向移植到大鼠海马部位和通过尾静脉注射移植,假移植组将等量生理盐水通过立体定向移植到大鼠海马部位,正常对照组大鼠不做处理。3、造模前后和BMSCs移植后均进行Morris水迷宫行为学测试,包括定位航行试验和空间探索试验。BMSCs移植后30天后各组大鼠断头取脑,制备石蜡切片,行苏木素-伊红（HE）染色观察病理变化。③以NSE、GFAP、DXC及Nestin作为增殖、分化的标记物。免疫组化染色方法检测DXC及Nestin阳性细胞、Brdu+NSE与Brdu+GFAP的双阳性细胞。探讨不同途径移植的MSCs在脑缺血大鼠的脑内的存活、迁移及分化情况,并探讨其机制。结果：（1）通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离大鼠骨髓间充质干细胞,在体外进行传代、扩增。经流式细胞仪检测分离所得细胞表达粘附分子CD90（BMSCs的标志之一）阳性率99%,CD31（内皮细胞标志）阳性率3.4%,CD34（骨髓造血干细胞标志）阳性率0.3%,证实所分离的细胞大部分为骨髓间充质干细胞。（2）采用永久结扎双侧颈总动脉制作血管性痴呆大鼠模型后,通过Morris水迷宫行为学测试,造模后7天、造模后30天与造模前相比,逃避潜伏期延长,存在统计学差异（P<0.05）,证实造模成功。（3）BMSCs移植后30天,模型组、立体定向移植组和尾静脉移植组进行行为学测试,三者之间相比,立体定向移植组和尾静脉移植组较模型组逃避潜伏期缩短（P<0.05）,并且立体定向移植组优于尾静脉移植组之间有统计学差异（P<0.05）。（4）BMSCs移植组在移植部位可观察到Nestin单染阳性细胞,Brdu十NSE、Brdu+GEAP双染阳性细胞。证实移植的BMSCs已在宿主脑内成活,并且已分化为神经元和神经胶质细胞。结论：（1）BMSCs可以在体外分离、培养,传代后可获得纯度较高的骨髓间充质干细胞。（2）采用永久结扎双侧颈总动脉制作大鼠血管性痴呆模型简单易行.结果可靠,可以用于血管性痴呆的研究。（3）经立体定向移植和尾静脉移植后,BMSCs可在脑内存活并分化成神经元样及神经胶质样细胞,改善受损的神经功能。（4）立体定向移植治疗效果较尾静脉移植治疗效果更好。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 附图
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 参考文献
• 致谢