骨髓间充质干细胞体外生物学特性及经皮注射修复骨缺损的实验研究

论文题目: 骨髓间充质干细胞体外生物学特性及经皮注射修复骨缺损的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 外科学

作者: 庞金辉

导师: 黄煌渊

关键词: 间充质干细胞,骨髓,细胞培养,细胞分化,成骨细胞,流式细胞术,表面分子,增殖,细胞凋亡,地塞米松,骨缺损

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的体外培养和成骨诱导体系。研究hMSCs表面抗原的表达情况,以及体外传代培养和成骨诱导对表面抗原的影响。评价体外传代培养对hMSCs增殖能力和凋亡的影响。研究地塞米松对hMSCs增殖、ALP表达和凋亡的影响。观察经体外扩增、成骨诱导hMSCs的体内成骨能力,评价其经皮注射修复小段骨缺损的疗效。方法:1.hMSCs的体外培养:抽取红骨髓,离心收集细胞,以1.073g/mL的Percoll分离液梯度密度离心,取单个核细胞于培养箱内孵育,观察细胞形态、生长曲线和细胞周期。2.hMSCs的成骨诱导:将hMSCs以含有地塞米松、抗坏血酸和β-甘油磷酸钠的OS液培养,观察形态学改变,分别行碱性磷酸酶(ALP)染色、Ⅰ型胶原和骨钙素的免疫组化染色及钙化结节Von Kossa染色,并定量测定ALP活性。3.取不同培养代数和不同诱导天数的hMSCs,流式细胞仪检测细胞表面抗原的表达情况。4.取不同继代的hMSCs,分别检测增殖能力,并通过流式细胞仪检测其凋亡率。5。地塞米松对hMSCs的影响:以不同浓度地塞米松处理hMSCs,分别检测MTT增殖率、ALP活性和凋亡率。6.动物实验:抽取兔骨髓,以Percoll分离液离心纯化,取MSCs体外培养扩增至所需数量,以OS液诱导成骨分化,将其经皮注射植入自体兔骨缺损,以自体红骨髓移植入对侧缺损作为对照,放射学、组织学、形态剂量学分析和生物力学检测缺损的修复情况。结果:1.体外培养的hMSCs贴壁生长,呈长梭形,细胞器少,可增殖形成克隆,经OS液诱导后细胞呈多角形,胞浆内含丰富的粗面内质网、线粒体和溶酶体等,可重叠生长。hMSCs大部分处于静止期,只有24.6%处于分裂周期,生长曲线为典型的S形曲线。经成骨诱导后,hMSCs ALP染色、胶原和骨钙素组化染色、钙化结节染色阳性,对照组均为阴性。2.hMSCs阳性表达CD29、CD44、CD71、CD90、CD105、CD166,但CD14、CD34、CD38、CD45呈阴性。CD71、CD90、CD166的阳性表达率在成骨诱导时出现不同程度的下降,但每种抗原在不同继代之间的差异无统计学意义。成骨诱导可显著增加ALP活性,于诱导第12d达高峰,为未诱导组的4-5倍,诱导组和对照组不同继代ALP活性的差异均无统计学意义。3.随传代次数的增加,hMSCs的增殖能力逐渐下降,凋亡率升

论文目录:

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英文摘要

引言

第一部分成人骨髓间充质干细胞的体外培养及其成骨诱导

第二部分人骨髓间充质干细胞的表面抗原分析

第三部分体外培养人骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡分析

第四部分地塞米松对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

第五部分自体骨髓间充质干细胞经皮注射修复兔桡骨干缺损

全文结论

参考文献

致谢

综述

发表文章目录

发布时间: 2005-09-19

参考文献

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