蛋白酶激活受体在人单核细胞和T细胞上的表达及功能

论文摘要

凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶等丝氨酸蛋白酶能调节凝血和纤维蛋白溶解平衡、降解神经肽以参与神经性水种，调控补体系统从而在炎症反应时发挥免疫调节作用。近年的研究显示，它们还能通过蛋白酶激活受体（proteinase activated receptor，PARs）调节细胞的功能而在炎症和免疫反应中起重要作用。PARs是新的G蛋白偶联受体，目前已发现有四种PARs，分别为PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4，凝血酶可以激活PAR-1、PAR-3和PAR-4，胰蛋白酶可以激活PAR-1、PAR-2和PAR-4，类胰蛋白酶和弹性蛋白酶可以激活PAR-2。单核细胞和T淋巴细胞是炎征和免疫反应重要的效应细胞，但是PARs在人外周血单核细胞和T细胞上表达及它们分泌的细胞因子上的影响则知之甚少。 采用磁激活的细胞分选法（magnetic activated cell sorting，MACS）纯化人外周血单核细胞和T细胞，分别用RT-PCR和流式细胞术检测外单核细胞和T细胞上的PARs在基因和蛋白质水平的表达；用凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶及PARs的激动肽分别激发MACS纯化后单核细胞和淋巴细胞16小时后，用ELISA检测单核细胞培养上清液中的IL-6、IL-1β和IL-12，T细胞培养上清液中的IL-6和IL-13。 实验显示，人外周血单核细胞表达PAR-1、PAR-3和PAR-4但不表达PAR-2蛋白质，单核细胞表达PAR-1和PAR-3，但是不表达PAR-2和PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶和弹性蛋白酶呈浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6，当这些蛋白酶酶活性被它们的抑制剂抑制后，它们诱导单核细胞产生IL-6的能力被抑制。PAR-1激动肽SFLLR-NH2和PAR-4激动肽GYPGQV-NH2可浓度依赖性地诱导单核细胞产生IL-6，PAR-1反激动肽RLLFS-NH2和PAR-4反激动肽VQGPYG-NH2不能诱导单细胞产生IL-6，而PAR-3激动肽TFRGAP-NH2和反激动肽PAGRFT-NH2对于单核细胞产生IL-6无明显作用。蛋白酶及PAR激动肽在各自工作浓度对于单核细胞产生IL-1β和IL-12无明显作用。 实验还显示，人外周血T细胞表达PAR-1、PAR-和PAR-3但不表达PAR-4蛋白质，与流式细胞结果一致，T细胞表达PAR-1、PAR-2和PAR-3，但是不表达PAR-4 mRNAs。凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶呈浓度依赖性地诱导T细胞产生IL-6，当这些蛋白酶酶活

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英文缩略语
• 综述
• 致谢
• 在攻读学位期间发表的文章