论文摘要
核心蛋白聚糖（decorin,DCN）是一种小分子富含亮氨酸的硫酸皮肤素蛋白聚糖,广泛存在于正常细胞外基质中,其核心蛋白具有抑制细胞增殖、影响细胞外基质形成等多种生物学作用。DCN 基因外显子序列长1080bp,编码395 个氨基酸。目的通过克隆hDCN 基因,构建原核表达体系并表达DCN 蛋白,进一步研究其对胃癌细胞株BGC-823 的抗增殖作用以及对细胞突变P53、血管内皮细胞生长因子（VEGF）表达的影响。方法首先利用DCN 特异引物,通过RT-PCR 方法从人肌肉组织中扩增编码DCN 分子的外显子序列,与pET-21a（+）载体连接,构建原核表达体系pET-21a（+）-DCN 的重组质粒。经双酶切、测序鉴定基因序列,然后将鉴定正确的重组质粒转入表达工程菌E.coli BL21（DE3）中,用IPTG 37℃诱导获得DCN 融合蛋白。SDS-PAGE 凝胶电泳分离、洗脱、透析纯化后,得到纯化的融合蛋白。在胃癌细胞株BGC-823 培养液中加入不同浓度的DCN,作用一定时间后,用活细胞计数、MTT 法测定DCN 对BGC-823细胞生长的抑制作用,通过倒置显微镜、HE 染色观察细胞的形态学变化。利用免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞中突变P53、VEGF 在处理前后的变化。结果本研究克隆了hDCN 基因,成功构建了pET-21a（+）-DCN 重组质粒。重组质粒双酶切以及测序结果均证明克隆的DCN 基因完全正确,获得了稳定表达pET-21a（+）-DCN 的原核表达体系,并得到了纯化的融合蛋白。用DCN 对胃癌细胞株BGC-823 进行干预的结果表明,DCN 在530μg/ml 对胃癌细胞BGC-823 均有抑制作用,并表现出浓度依赖性关系,各剂量组间均有显著性差异（P<0.05）,且随着作用时间延长生长抑制率也增加（P<0.05）。在倒置显微镜下及HE 染色后可以看到处理组细胞体积缩小、变圆、细胞突起回缩,细胞核浓缩、有凋亡小体形成。免疫细胞化学结果表明突变P53、VEGF 在处理组中的表达显著低于未处理的对照组,而且作用呈现时间和剂量效应（P<0.05,P<0.01）。结论本课题制备了pET-21a（+）-DCN 稳定的原核表达体系,表达并纯化了DCN,进一步研究了其生物学活性。DCN 有诱导胃癌细胞凋亡和抗增殖的作用,并能下调胃癌细胞中突变P53 和VEGF 的表达,这种作用可能与其抗增殖、抑制肿瘤细胞浸润有关。
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- [6].BGC-823细胞脾脏注射法建立胃癌肝转移模型[J]. 湖北医药学院学报 2020(01)
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- [9].青蒿琥酯诱导胃癌BGC-823细胞死亡的实验研究[J]. 浙江医学 2017(14)
- [10].异欧前胡素对人胃癌BGC-823细胞的凋亡诱导作用的研究[J]. 国际消化病杂志 2016(04)
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- [12].加味六君子汤含药血清对胃癌细胞BGC-823增殖和凋亡的影响[J]. 浙江中西医结合杂志 2010(04)
- [13].大豆低聚糖对人胃癌细胞株BGC-823细胞的细胞凋亡和细胞周期的影响[J]. 中国微生态学杂志 2010(05)
- [14].血管性血友病因子体外对胃癌细胞BGC-823增殖和黏附的影响[J]. 肿瘤防治研究 2009(01)
- [15].活性炭纳米粒子对人胃癌BGC-823细胞作用的体外实验研究[J]. 军事医学科学院院刊 2009(01)
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- [17].两种新型竹红菌乙素衍生物在人胃腺癌BGC-823细胞中吸收规律的研究[J]. 中国激光医学杂志 2012(02)
- [18].薏苡仁酯对胃癌BGC-823细胞侵袭迁移能力的影响及其机制[J]. 东南大学学报(医学版) 2010(03)
- [19].甘草甜素对胃癌细胞BGC-823增殖作用的影响[J]. 世界华人消化杂志 2015(18)
- [20].桂皮醛诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡及相关分子机制的探讨[J]. 世界科学技术-中医药现代化 2013(05)
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- [22].白藜芦醇对BGC-823胃癌细胞株增殖抑制作用的体外研究[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2014(10)
- [23].cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC-823迁移的影响[J]. 江苏大学学报(医学版) 2010(02)
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- [25].姜黄素联合光照对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡作用的研究[J]. 中华中医药学刊 2010(08)
- [26].益气复生方抑制人胃癌细胞BGC-823增殖和迁移的研究[J]. 上海中医药杂志 2019(12)
- [27].姜黄素联合光照对BGC-823细胞膜通透性及线粒体膜电位的影响[J]. 集美大学学报(自然科学版) 2011(04)
- [28].全反式维甲酸对胃癌BGC-823细胞增值和凋亡的影响及其机制研究[J]. 中国实用医药 2010(05)
- [29].乙烷硒啉与顺铂或氟尿嘧啶联合应用对胃癌BGC-823的治疗作用[J]. 中国新药与临床杂志 2008(11)
- [30].熊果酸增强人胃癌BGC-823细胞对紫杉醇敏感性的研究[J]. 世界中西医结合杂志 2016(02)