水浮莲（Pistia stratiotes L.）内生菌的分离及农作物致病菌拮抗菌株的筛选与鉴定

论文摘要

本文通过表面消毒和碾碎法从水浮莲（Pistia stratiotes L.）中共分离获得72株内生菌。根据形态学观察初步确定为61株细菌、9株放线菌和2株真菌。根据形态学观察、培养特征和生理生化试验,将9株放线菌初步鉴定为诺卡氏菌属,链孢囊菌属和游动放线菌属。采用琼脂扩散法进行拮抗实验,筛选出3株拮抗菌——XJPL-YB-23、XJPL-YB-26和XJPL-YB-50分别对苹果斑点落叶病菌、西瓜枯萎病菌和玉米小斑病菌有拮抗能力。依据形态特征、生理生化检测、16S rDNA和G+Cmo1%,最终将3株拮抗菌鉴定为枯草芽孢杆菌。生物学特性实验表明,XJPL-YB-23和XJPL-YB-2NaCl%生长范围均为0%-10%,最适NaCl%分别为2%和0%;pH生长范围分别为5-10和6-10,最适pH值分别为6和8。敏感性实验结果显示,XJPL-YB-26的发酵液对高温和氯仿部分敏感,而对高温高压极其敏感,经高温高压处理后无拮抗作用;XJPL-YB-50经高温高压处理20min后仍然有抑菌圈。这初步证明,XJPL-YB-26的拮抗物质为有机活性成分。同时UV-光谱显示,XJPL-YB-26的发酵液上清在280nm处有最大吸收峰,表明其拮抗成分为蛋白类物质,具体的成分尚待进一步研究证明。在西瓜活体植物上的检测结果表明,XJPL-YB-26对西瓜枯萎病菌的确有抑制作用,这为进一步的研究其拮抗机制提供了很好的实验材料。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章、引言
• 1.1 植物内生菌简介
• 1.1.1 植物内生菌的概念
• 1.1.2 植物内生菌的作用
• 1.1.2.1 生物学作用
• 1.1.2.2 生物防治
• 1.1.3 植物内生菌产生物活性物质的可能机理
• 1.2 水浮莲及其内生菌
• 1.3 本课题的研究意义
• 1.3.1 农作物致病菌的防治
• 1.3.1.1 传统方法
• 1.3.1.2 抗病育种
• 1.3.1.3 生物防治
• 1.3.2 课题意义
• 参考文献
• 第二章、内生菌的分离纯化及内生放线菌初步分类
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试植物
• 2.1.2 培养基
• 2.2 方法
• 2.2.1 植物的表面消毒及内生菌的分离
• 2.2.2 表面消毒方法的可行性验证
• 2.2.3 内生菌的纯化和保存
• 2.2.4 内生放线菌株的初步分类
• 2.2.4.1 形态观察
• 2.2.4.2 培养特征
• 2.2.4.3 生理生化
• 2.2.4.3.1 淀粉水解实验
• 2.2.4.3.2 酪素水解实验
• 2.2.4.3.3 H2S 生成实验
• 2.2.4.3.4 硝酸盐还原实验
• 2.2.4.3.5 甲基红实验
• 2.2.4.3.6 碳源利用实验
• 2.3 结果
• 2.3.1 表面消毒方法的可行性验证
• 2.3.2 内生菌分离结果
• 2.3.3 内生放线菌的初步鉴定
• 2.3.3.1 形态观察
• 2.3.3.2 生理生化特征
• 2.4 分析讨论
• 参考文献
• 第三章、农作物致病菌拮抗菌株的筛选
• 3.1 材料
• 3.1.1 供试菌株
• 3.1.2 供试病原菌
• 3.1.3 培养基
• 3.2 方法
• 3.2.1 内生菌株发酵液的制备
• 3.2.2 致病真菌菌悬液的制备
• 3.2.3 拮抗菌株的筛选
• 3.2.3.1 采用平板扩散法
• 3.2.3.2 采用对峙法
• 3.3 结果
• 3.4 分析讨论
• 参考文献
• 第四章、农作物致病菌拮抗菌株的鉴定
• 4.1 材料
• 4.1.1 菌株
• 4.1.2 培养基
• 4.1.3 试剂
• 4.2 方法
• 4.2.1 形态结构和培养特性观察
• 4.2.2 生理生化试验
• 4.2.3 菌株的生物学特性
• 4.2.4 内生菌菌株基因组的提取
• 4.2.5 菌株1651DNA 序列的 PCR 与测序
• 4.2.5.1 XJPL-YB-23 菌株1651DNA 序列的 PCR 与测序
• 4.2.5.2 XJPL-YB-26 菌株1651DNA 序列的 PCR 与测序
• 4.2.5.3 XJPL-YB-50 菌株1651DNA 序列的 PCR 与测序
• 4.2.6 胶的回收
• 4.2.7 扩增产物的测序
• 4.2.8 G+C%含量的测定
• 4.2.9 16SrDNA 序列分析
• 4.2.10 拮抗物质的初步研究
• 4.2.10.1 拮抗物质的敏感性实验
• 4.2.10.1.1 对高温的敏感性实验
• 4.2.10.1.2 对高压的敏感性实验
• 4.2.10.1.3 对有机溶剂的敏感性实验
• 4.2.10.2 拮抗物质的 UV-光谱图
• 4.2.11 活体植物的初步检测
• 4.3 结果
• 4.3.1 苹果斑点落叶病拮抗菌 XJPL-YB-23 菌株的鉴定
• 4.3.1.1 形态结构和培养特性观察
• 4.3.1.2 生理生化试验
• 4.3.1.3 生物学特征
• 4.3.1.4 16SrDNA 序列及其系统发育树
• 4.3.2 西瓜枯萎病拮抗菌 XJPL-YB-26 菌株的鉴定
• 4.3.2.1 形态结构和培养特性观察
• 4.3.2.2 生理生化试验
• 4.3.2.3 生物学特征
• 4.3.2.4 16SrDNA 序列及其系统发育树
• 4.3.3 玉米小斑病拮抗菌 XJPL-YB-50 菌株的鉴定
• 4.3.3.1 形态结构和培养特性观察
• 4.3.3.2 生理生化试验
• 4.3.3.3 16SrDNA 序列及其系统发育树
• 4.3.3.4 G+C%mol 含量
• 4.4 拮抗物质的初步研究
• 4.4.1 敏感实验
• 4.4.2 拮抗物质的 UV-光谱图
• 4.5 活体植物的初步检测
• 4.6 分析讨论
• 参考文献
• 第五章、结论和展望
• 附录
• 1. 培养基配方
• 2. 染色液及检测试剂的配制
• 3. 英文名称对照表
• 4. 所用设备仪器简介
• 在读期间发表论文清单
• 致谢