早胚发育促进因子-1作用靶分子的筛选大鼠卵母细胞能在联合培养系统中成批成熟

论文题目: 早胚发育促进因子-1作用靶分子的筛选大鼠卵母细胞能在联合培养系统中成批成熟

论文类型: 博士论文

论文专业: 生物化学与分子生物学

作者: 颜桂军

导师: 左嘉客,申庆祥,徐万祥

关键词: 早期三级卵泡,卵母细胞,联合培养系统,适当成熟,双杂交筛选,蛋白

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 输卵管蛋白(Oviduct-specific glycoprotein，Oviductin)是哺乳动物输卵管粘膜上皮细胞特异性表达分泌的高糖基化蛋白质，普遍存在于各种哺乳动物的输卵管分泌物中，为配子的成熟、转运、受精和早胚的发育营造了一种适宜的微环境，但具体的作用机制尚不清楚。本实验室从兔输卵管粘膜上皮细胞的cNDA文库中筛选出兔的全长Oviductin cDNA(1.9kb)，其演绎分子量为64kDa，命名为早胚发育促进因子-1(Development Promocing Factor-1，DPF-1)。DPF-1与其它物种的输卵管糖蛋白具高度同源性。为了研究其在早胚发育过程中潜在的生物学功能，进行了下列实验： 建立了离体未完全分化颗粒细胞、动情前期垂体前叶和Δ-4雄烯二酮组成的“联合培养系统”。该联合培养系统可模拟正常生理状态下卵泡中各相关细胞间的协同作用，更有效地诱导经己烯雌酚刺激后大量源自大鼠早期三级卵泡中卵母细胞同步成熟，并能正常受精和发育。经DES刺激，每侧幼龄大鼠卵巢中平均可取得189枚同步发育的卵母细胞，经在联合培养系统中培养，77.6％的卵母细胞排出第一极体达到成熟。这些成熟的卵母细胞中87.8％可正常受精，93％卵裂；经体外培养96h，有59％的受精卵可发育到桑椹或囊胚。2-细胞期胚胎移植后可发育成为健康个体。为研究大鼠卵成熟、受精和早胚发育的分子机制所需的大量实验模型提供了物质基础。 为了从分子水平研究DPF-1在早期胚胎发育中的作用机制，建立了大鼠成熟卵母细胞pMyr cDNA文库，文库容量为8×10~5pfu／ug cDNA。pSos／1.9kb DPF-1cDNA诱饵蛋白质粒对大鼠成熟卵母细胞pMyr cDNA文库进行了双杂交筛选，从大鼠成熟卵母细胞pMyr cDNA文库中初筛出132个阳性克隆，终筛出1个阳性克隆。经测序提示插入片段约为400bp核苷酸，核苷酸序列同源性分析比较，发现与activating signal cointegrator 1 complex subunit 2(ASC-1 complex subunit p100)蛋白核苷酸序列有93％一致性。p100蛋白在多种组织中表达，特别在卵巢组织和移植前胚胎中广泛表达，并与p50、p200和ASC-1共同组成了ASC-1复合体，来调节SRF(serum response factor)、AP-1(activating protein 1)和NF-B(nuclear factor B)等转录因子的活性。对p100蛋白与DPF-1相互作用关系进行研究可望为进一步深入分析输卵管蛋白的作用机制提供线索。

论文目录:

目录

缩略词

中文摘要

英文摘要

前言

(1) 大量健康发育的卵母细胞获取方法的建立:

(2) 2DPF-1作用靶分子的筛选:

第一部分:大鼠三级早期卵泡中的卵母细胞能在体外达到适当成熟

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

第二部分:DPF-1与其靶蛋白相互作用的研究

1、材料

2、方法

3、结果与讨论

第三部分:附录

第一节:DPF-1羧基端13肽(Oviductin-13肽)单克隆抗体的制备

1、材料

2、方法

3、结果与讨论

第二节:具生殖系嵌合能力的C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的建立

1、材料

2、方法

3、结果

4、讨论

参考文献

总结

进一步工作计划

博士期间发表和待发表的文章

综述:哺乳动物卵泡发育的分子调控机制

致谢

发布时间: 2007-06-28

参考文献

• [1].GSK-3β调控小鼠卵母细胞第一次减数分裂与原始卵泡形成机制的研究[D]. 文佳.中国农业大学2018
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• [3].爪蟾p21活化激酶2参与卵母细胞胞质分裂过程不依赖于Cdc42[D]. 梁彬.中国医科大学2007
• [4].同异种间体细胞克隆胚的体外培养及线粒体、表面抗原检测[D]. 马利兵.西北农林科技大学2007
• [5].卵母细胞体外成熟及人胚胎玻璃化冷冻的研究[D]. 冯贵雪.广西大学2006
• [6].未成熟卵体外培养成熟机制的探讨[D]. 刘新宇.中国医科大学2007
• [7].小鼠异性移植卵巢卵泡及卵母细胞发育研究[D]. 袁安文.湖南农业大学2007
• [8].新生大鼠卵母细胞凋亡信号通路调控的实验研究[D]. 刘红.汕头大学2009
• [9].兔子体外成熟卵母细胞用于体细胞核移植的研究[D]. 刘勇.山东农业大学2009
• [10].马体细胞核移植的研究[D]. 赵高平.内蒙古农业大学2011

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