肠道亚健康人群结肠粘膜蛋白质组学研究

论文摘要

目的：研究肠道亚健康便秘（intestinal tract sub-health constipation）及大便不成形（the bowel does not shape）人群结肠粘膜蛋白质的变化特征,并对部分差异蛋白质进行鉴定与功能分析,为探讨肠道亚健康便秘及大便不成形人群的结肠粘膜改变机制提供理论依据。方法：肠道亚健康便秘20例,诊断均符合便秘罗马Ⅲ标准,大便不成形患者20例,正常对照组20例。分别在进行结肠镜检查时,直视下取结肠粘膜,立即置于含0.1%苯甲基磺酰氟的冰盐水中洗净,液氮保存。提取组织总蛋白后,进行双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）,采用考染法对凝胶进行显色固定,扫描仪获取图像。使用Image Master 2D Elite分析软件进行图像分析,筛选出在亚健康便秘组与大便不成形组中表达有明显差异的蛋白质点,应用生物质谱,蛋白质库等技术对部分表达差异的蛋白质进行鉴定、功能和临床意义分析。结果：正常对照组平均胶蛋白斑点数为535,便秘组平均胶蛋白斑点数为501,与正常对照组平均胶匹配点数为324,匹配率为64.67%；175个蛋白质点的表达量存在显著差异,挑选20个蛋白点进行蛋白鉴定,鉴定出17个点,其中10个蛋白点表达上调,7个蛋白点表达下调。表达上调的蛋白质经鉴定为唾液酸酶、多聚胞嘧啶结合蛋白1、3-磷酸甘油醛脱氢酶、脂酶D、碳酸酐酶Ⅰ、类胰蛋白酶p-1、蛋白酶体激活复合物亚基2、MAWD结合蛋白、磷脂结合蛋白Ⅰ和肽基脯氨酰顺反异构酶。表达下调的蛋白质点经鉴定为细胞角蛋白8、乙醛脱氢酶1、锌指蛋白658、硫氧还蛋白样蛋白、β-肌动蛋白、硫代硫酸硫转移酶、YWHAZ蛋白。大便不成形组平均胶蛋白斑点数为517,与正常对照组平均胶匹配点数为366,匹配率为70.80%；150个蛋白质点的表达量存在显著差异,挑选10个蛋白点进行蛋白鉴定,鉴定出8个点,其中3个蛋白点表达上调,5个蛋白点表达下调。表达上调的蛋白质经鉴定为碳酸酐酶Ⅰ、膜联蛋白A5和亲环素A。表达下调的蛋白质点经鉴定为醛脱氢酶A1、线粒体羟甲基辅酶A合成酶、热休克蛋白8、γ-肌动蛋白和载脂蛋白A-I。结论：1、应用双向凝胶电泳方法成功得到了肠道亚健康便秘和大便不成形人群结肠黏膜组织蛋白质组表达图谱。2、肠道亚健康便秘组中鉴定出17个蛋白质。有10个蛋白质点表达明显上调,7个蛋白质点表达显著下调。其中锌指蛋白658、p-肌动蛋白、YWHAZ蛋白和硫代硫酸硫转移酶可能与亚健康便秘的发生、发展有关；乙醛脱氢酶1、肽基脯氨酰顺反异构酶、细胞角蛋白8及碳酸酐酶Ⅰ可能与长期便秘向肿瘤发展有关。3、肠道亚健康大便不成形组中鉴定出8个蛋白质。其中3个蛋白质点表达明显上调,5个蛋白质点表达明显下调。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩写词简表
• 前言
• 1 材料和方法
• 1.1 实验材料
• 1.1.1 结肠粘膜组织
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要试剂的配制
• 1.1.4 主要仪器
• 1.1.5 生物信息学软件
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 技术路线
• 1.2.2 收集结肠粘膜组织
• 1.2.3 结肠粘膜组织的处理及蛋白质的提取
• 1.2.4 蛋白浓度测定
• 1.2.5 双向凝胶电泳
• 1.2.6 考马斯亮蓝染色
• 1.2.7 凝胶图象分析
• 1.2.8 质谱样品制备
• 1.2.9 质谱分析
• 1.2.10 数据库查询
• 2 结果
• 2.1 总蛋白浓度测定
• 2.2 肠道亚健康人群结肠粘膜双向凝胶电泳图谱及图谱分析
• 2.3 肠道亚健康人群结肠粘膜相关蛋白质的筛选
• 2.3.1 肠道亚健康便秘组结肠粘膜2-DE图谱差异蛋白质点的分析
• 2.3.2 肠道亚健康大便不成形组结肠粘膜2-DE图谱差异蛋白质点的分析
• 2.3.3 便秘组差异蛋白质点的质谱分析及生物信息学检索
• 2.3.4 大便不成形组差异蛋白质点的质谱分析及生物信息学检索
• 3 讨论
• 3.1 双向凝胶电泳
• 3.2 肠道亚健康便秘人群结肠粘膜相关差异表达蛋白质
• 3.3 肠道亚健康大便不成形人群结肠粘膜相关差异表达蛋白质
• 4 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果