银杏叶提取物对三氯乙烯诱导体外培养皮肤角质形成细胞损伤的保护作用

论文摘要

目的 探讨银杏叶提取物对三氯乙烯诱导体外培养人皮肤角质形成细胞毒性作用的保护作用。 方法 将来自3或3个以上不同个体的正常皮肤角质形成细胞混合培养后,于对数增长期进行染毒,利用中性红吸附实验,求出三氯乙烯的NR50,并以其为依据,选取不同的染毒剂量作用于体外培养的人皮肤角质形成细胞。使用LDH释放检测试剂盒检测细胞膜损伤状况;使用MDA、SOD、ROS、NO、NOS试剂盒,测定三氯乙烯对体外培养的皮肤角质形成细胞氧化应激水平和NO、iNOS、cNOS水平的影响,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测iNOSmRNA、cNOSmRNA的表达水平;使用Ladder实验、透射电子显微镜和流式细胞仪对三氯乙烯诱导的角质形成细胞凋亡进行定性和定量检测。并于对数增长期向其中加入不同浓度的银杏叶提取物作用2小时,然后使用2.0 mmol/L三氯乙烯与不同浓度银杏叶提取物混合物与细胞发生作用来检测银杏叶提取物的保护作用。对数据采用SAS 6.12进行统计分析。 结果 本研究发现:①三氯乙烯对皮肤角质形成细胞毒作用的NR50为4.52524 mmol/L,95%可信限为（3.92210,5.12838）;同时作为阳性对照的SLS对皮肤角质形成细胞毒作用的NR50为0.27727 mmol/L,95%可信限为（0.19300,0.36154）,处于相关文献报道的质量控制范围之内。②LDH释放检测结果显示三氯乙烯可以引起体外培养的皮肤角质形成细胞膜损伤,接触三氯乙烯时间越长、浓度越高,细胞膜损伤越严重。银杏叶提取物对三氯乙烯引起的体外培养的人皮肤角质形成细胞膜的损伤具有保护作用,当银杏叶提取物的浓度达到150 mg/L

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