心肌β1-肾上腺素受体及M2-乙酰胆碱能受体在心肌顿抑中的动态表达

论文摘要

研究背景心肌顿抑（Myocardial Stunning,MS）又称缺血后心肌功能障碍,是指心肌短时缺血尚不足以造成心肌坏死,但再灌注后恢复正常或接近正常的血流后其机械功能障碍却需数小时、数天甚至数周才能完全恢复的病理过程。心肌顿抑现象普遍存在于临床中,是左心功能不全发生率和病死率增加的原因之一。大量的动物实验及临床研究表明,心肌顿抑已经构成了临床心脏直视手术及心脏移植术后常见的心功能障碍发生的主要病理生理基础,成为近年来临床心脏外科治疗过程中常见的问题。体外循环使血液内儿茶酚胺、血管紧张素、血管加压素增加,周身血管张力增加,肌丝对Ca2+敏感性降低,大量的正性肌力药只能增加心肌ATP（三磷酸腺苷）的耗竭,不利于ATP的储存,易使心肌的损伤向不可逆的方向发展。目前,在心肌顿抑众多发生机制假说中,“氧自由基”和“钙超载”理论是最为主要的两个,但是对于它的确切发病机制仍没有定论。国内外许多的实验研究发现,在心肌组织中存在多种受体系统,如β—肾上腺素能受体、M—乙酰胆碱能受体、血管紧张素受体、腺苷受体等受体系统。心肌上的这些受体均是参与调节心脏活动的受体,它们主要是通过心肌细胞膜上的信号传导系统发挥其对心脏活动的调节,对正常心功能的维持起着重要的作用。然而,对于心脏受体系统的数量和功能在心肌顿抑的病理生理过程中的变化方式以及受体间相互调节的机制,国内外关于此方面的研究很少。随着分子生物学和药理学的深入研究,为认识受体对缺血性心脏病的作用机制提供了研究平台。目的本实验分别在细胞和基因水平观察顿抑心肌的受体的变化,对心肌细胞膜上受体的生理功能及其在心肌顿抑状态下的动态表达进行研究,旨在为阐明MS发生机制提供一种全新的研究途径,同时为进行探索性研究心肌顿抑时受体的调节、信号转导的机制、药物干预后心肌功能的变化等提供研究模型。方法第一部分:构建大鼠心肌顿抑模型,并进行临床评价。健康成年雄性SD大鼠48只,随机分成对照组和手术组:手术组对冠状动脉左前降支进行阻断15min,按缺血后再灌注时间的不同分为5组:①再灌注后1小时组;②再灌注后4小时组;③再灌注后8小组;④再灌注后24小组;⑤再灌注后72小时组。阴性对照组不进行左冠状动脉前降支阻断。麻醉实验SD大鼠,通过胸骨左缘第4肋间开胸,暴露心脏,以带针滑线缝取冠状动脉左前降支,收紧滑线进行阻断,松开即恢复灌注,建立MS模型。全程监测心电图,并进行保存。第二部分:β1-肾上腺素受体及M2—乙酰胆碱能受体的检测。采用免疫组织化学法及RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）法对顿抑区心室肌组织进行检测,通过对不同组别心肌组织中两种蛋白的表达情况的半定量分析,观察β1-肾上腺素受体及M2—乙酰胆碱能受体在心肌顿抑时的变化规律。结果（1）以左心室前壁紫绀及同步心电图示S—T段抬高,QRS波幅度升高为阻断成功标志。复灌时左室前壁缺血区紫绀消失,同步心电图示S—T段、QRS波回落至正常。对顿抑区心室肌进行组织学检查苏木素-伊红（HE）染色:对照组和实验组大鼠心脏在光镜下心肌组织无差异,均为正常心肌结构。由此可以判定SD大鼠MS模型制作成功。（2）阻断SD大鼠左冠状动脉前降支15分钟恢复再灌注后,β1-AR表达水平与再灌注时间有依赖关系:于再灌注1小时急剧升高,并达到高峰,与对照组及其他手术组相比,有显著统计学差异（P＜0.05）;之后逐渐降低,72小时后恢复到正常水平。M2-AChR表达水平在再灌注4小时降至最低,与对照组及其他手术组相比,有显著统计学差异（P＜0.05）,之后逐渐升高;至再灌注8小时达高峰,与对照组和再灌注1、4小时组相比有显著统计学差异（P＜0.05）,24小时有所下降,72小时后与对照组、再灌注1、4、24小时组相比开始升高（P＜0.05）。心肌细胞上的β1—AR和M2—AchR的含量存在差异,后者明显比前高。结论（1） SD大鼠心肌顿抑模型制备成功;（2）β1-AR及M2-AChR参与了心肌顿抑的病理生理过程。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 引言
• 第一部分 心肌顿抑模型的建立
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 1-肾上腺素受体及 M₂-乙酰胆碱能受体的检测'>第二部分 心肌β₁-肾上腺素受体及 M₂-乙酰胆碱能受体的检测
• 1.材料和方法
• 2.结果
• 3.讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 附录一 个人简历
• 附录二 致谢
• 综述及参考文献