荷斯坦奶牛、罗米莉羊供核体细胞系的建立及生物学特性研究

论文摘要

本研究目的是建立荷斯坦奶牛和罗米莉羊供核体细胞系及对其生物学特性进行研究。试验一建立了适合成年荷斯坦奶牛、罗米莉羊耳部皮肤成纤维细胞体外培养的体系,用组织块法和不完全消化法培养的原代细胞生长状态良好,增殖旺盛。在传代培养过程中,用冷胰蛋白酶控时消化,得到了纯化的皮肤成纤维细胞。并对基础培养液进行了筛选,绘制了生长曲线。结果表明:该培养系统适合皮肤成纤维细胞的体外培养,DMEM、DMEM/F12 和RPMI1640 添加10%的血清和100IU/ml 双抗后均能满足培养细胞的生长需要。试验二建立了荷斯坦奶牛、绵羊卵丘/颗粒细胞的培养体系,结果表明:该培养体系中卵丘/颗粒细胞的倍增时间分别为1.14d 和1.08d。试验三探讨了绵羊卵丘/颗粒细胞在不同生长状态、不同传代次数的细胞周期特征和不同处理方法对细胞周期的影响。流式细胞仪分析结果显示:(1)未发现异倍体细胞;(2)第3 代和第13 代细胞不同汇合度处于G0/G1期细胞的比例分别为76.6±1.7%、83.4±1.65%、84.53±2.27%和66.8±1.84%、72.8±2.09%、76±3.41%。第3 代细胞经低温冷藏处理6h和直接血清饥饿培养3d后,处于G0/G1期细胞的比例分别为93.3±2.1%、92.43±1.02%。结果表明:低代细胞处于G0/G1期的比例显著高于高代的(P<0.05),低温冷藏法和血清饥饿法均能极显著地提高处于G0/G1期细胞比例(P<0.01)。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 文献综述
• 引言
• 第一章 哺乳动物组织细胞体外培养的发展简史
• 1.1 现代动物组织细胞体外培养的建立和发展
• 1.2 我国动物组织细胞培养的发展简史
• 1.3 建立荷斯坦奶牛和罗米莉羊供核体细胞系的研究进展及存在的问题
• 第二章 哺乳动物组织细胞体外培养技术的基本程序
• 2.1 原代培养
• 2.2 传代培养
• 2.3 细胞的冻存与复苏
• 2.4 影响哺乳动物组织细胞体外培养的主要因素
• 第三章 体外培养细胞的基本生物学特性
• 3.1 体内体外细胞发育的差异和分化
• 3.2 培养细胞的形态学
• 3.3 培养细胞的增殖动力学
• 第四章 细胞增殖周期与细胞周期同步化的方法
• 4.1 细胞增殖周期
• 4.2 细胞周期同步化的方法
• 第五章 体外培养细胞建系的要求与用途
• 5.1 体外培养细胞建系的要求
• 5.2 体外培养细胞的用途
• 第二部分 试验研究
• 试验一荷斯坦奶牛和罗米莉羊皮肤成纤维细胞系的建立
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 试验二荷斯坦奶牛、绵羊卵丘/颗粒细胞系的建立
• 1 . 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 试验三 绵羊卵丘/颗粒细胞周期同步化处理的流式细胞仪分析
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介