核因子-κB在苦参碱诱导的肝癌细胞凋亡中的作用

论文摘要

目的:研究苦参碱（matrine,Mat）对人肝癌细胞HepG2核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）活化的影响以及二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC）抑制核因子-κB活化对苦参碱诱导肝癌细胞HepG2凋亡的影响。方法:MTT法观察Mat组（0.8、1.0、1.5、2.0、2.5 g/L）及联合组（PDTC+Mat组）对细胞增殖的抑制作用;1.5g/L Mat作用HepG2细胞3h、6h、12h、24h后,采用免疫细胞化学法观察细胞中NF-κB的活化与分布,电泳迁移率变动分析（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测细胞NF-κB活化水平。将HepG2细胞接种于培养瓶,随机分为对照组、PDTC组（20μmol/L）、Mat组（1.5g/L）和联合组:PDTC（20μmol/L）+ Mat（1.5g/L）组,作用3小时后,分别采用免疫细胞化学法和电泳迁移率变动分析（EMSA）观察和检测细胞NF-κB的活化水平;作用12小时后,用流式细胞仪和末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）检测HepG2细胞凋亡。结果:1.一定浓度的Mat可抑制HepG2细胞增殖并且抑制作用呈时间和剂量依赖性;PDTC增强了Mat对细胞增殖的抑制作用。2.Mat作用不同时间能够不同程度地使细胞核中NF-κB免疫组化染色增强。对照组NF-κB在HepG2细胞胞浆中表达,Mat刺激后转入核内,胞核胞浆均阳性表达。PDTC作用后.再用Mat刺激,HepG2细胞核及细胞浆内NF-κB的表达减弱。3.EMSA检测结果显示: Mat作用不同时间能不同程度的诱导HepG2细胞NF-κB的活化,各组的NF-κB活化水平均高于对照组（P<0.01）,且苦参碱作用6h诱导NF-κB活化达高峰。PDTC组NF-κB活化水平低于对照组（P<0.01）,联合组NF-κB活化水平高于对照组（P<0.01）,但明显低于Mat组（P<0.01）。4.各组凋亡率分别为:对照组（2.41±0.74）%,PDTC组（3.07±0.46）%, Mat组为（6.11±0.81）%,PDTC+Mat组为（12.95±2.26）%。结论:苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡,亦可诱导HepG2细胞的NF-κB活化;PDTC可通过抑制NF-κB活化,增强苦参碱诱导HepG2细胞凋亡的作用。因此,NF-κB的激活在苦参碱诱导的肝癌细胞凋亡中可能起着抗凋亡的作用。

论文目录

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• 结果
• 讨论
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• 附图
• 文献综述
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• 攻读硕士学位期间发表的文章