淫羊藿多糖分析方法及膜分离制备工艺研究

论文摘要

淫羊藿是一种受历代中医所青睐的常用中药,现代研究的诸多进展也与其传统功效相吻合,淫羊藿多糖是其主要活性成分之一。本课题针对淫羊藿多糖分析和制备工艺中的一些难点问题进行了探索性的研究工作,主要创新点如下:1建立了一种多糖含量分析新方法—改良-差示酚硫法,该方法既能用于粗品多糖的含量分析,不需对多糖进行繁琐的纯化精制过程,又能克服传统苯酚硫酸法显色温度过高所容易导致的诸多干扰分析测定的误差因素;在研究中发现了粗品多糖的酚硫法测定中,供试液应当进行酸水稀释而不能进行中性水稀释的重要步骤;此外,还提出了相对吸收系数的概念,据此可以简化多糖含量分析中的计算方法和工作内容,在许多情况下可以不必依赖标准曲线,尤其适合于制备工艺等研究中常见的不同条件下所得样品之间多糖含量的比较。2对于膜分离技术用于中药成分分离纯化中的瓶颈--膜污染问题进行探索,研究其有效解决措施。本实验中所尝试的分步浓缩和活性炭吸附等预处理方法能有效克服膜污染,提高膜通量;此外,在优化微滤实验参数的基础上,考察了变压操作方式对渗出通量的影响,最终确定了水提取液预处理结合膜分离变压操作方式克服膜污染的方法,膜通量明显提高且能长时间维持在较高水平。该实验达到了预期目的,并利用该工艺路线分离制备了淫羊藿多糖,获得了便于工业化实施的淫羊藿多糖膜分离工艺制备方案。3研究了淫羊藿多种有效成分综合提取分离的一体化制备工艺方案,在多糖分离制备过程中同时兼顾分离生物碱和黄酮成分,实现了淫羊藿多种有效成分的综合利用,既能减少废渣排放,有利于保护环境,又能显著提高药材利用率,提高利润、降低成本,具有较好的工业化实施可行性。4本论文首次采用木瓜蛋白酶法除蛋白技术与膜分离相结合的淫羊藿多糖制备方法,对影响蛋白去除效果的酶解条件进行考察,并与Sevag法除蛋白效果进行比较,获得了有意义的实验结果。除以上创新点之外,本实验中还对淫羊藿多糖的热水提取和超声提取条件进行了比较研究,分别考察料液比、提取温度和提取时间等因素对多糖提取率的影响,设计正交试验优化提取条件,分析了两种方法的各自优势和不足,对其今后应用提出了建设性意见。本研究中在淫羊藿多糖分析方法和制备工艺方面进行了许多探索性工作,并且取得明显进展,期望能为同类工作的深入研究提供参考。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 文献综述
• 1.1 多糖
• 1.1.1 多糖概述
• 1.1.2 多糖的分析方法
• 1.1.2.1 多糖的含量分析方法
• 1.1.2.2 多糖的组分分析方法
• 1.1.2.3 多糖的结构分析方法
• 1.1.2.4 苯酚硫酸法的改进发展
• 1.1.3 多糖的提取方法
• 1.1.3.1 溶剂提取法
• 1.1.3.2 酶法提取
• 1.1.3.3 超声提取法
• 1.1.3.4 微波提取法
• 1.1.3.5 超滤法
• 1.1.4 多糖除蛋白方法
• 1.2 淫羊藿
• 1.2.1 多糖及其生物活性
• 1.2.2 黄酮类成分及其生物活性
• 1.2.3 生物碱成分及其生物活性
• 1.3 膜分离技术
• 1.3.1 膜分离技术简介
• 1.3.2 膜分离技术的分类
• 1.3.2.1 微滤
• 1.3.2.2 超滤
• 1.3.2.3 反渗透
• 1.3.2.4 纳滤
• 1.3.3 膜分离技术的分离特性
• 1.3.4 膜的污染与清洗
• 1.3.4.1 膜的污染与清洗
• 1.3.4.2 克服膜污染的措施
• 1.3.4.3 膜的清洗
• 1.3.5 膜分离技术在中药领域中的应用
• 1.4 本课题研究的根据、目的及意义
• 1.4.1 本课题研究的依据和目的
• 1.4.2 本课题的研究内容
• 第2章 淫羊藿多糖分析方法的研究
• 2.1 实验原料、试剂及仪器
• 2.2 实验方法及结果分析
• 2.2.1 酸水稀释方法的提出及探索
• 2.2.1.1 淫羊藿多糖样品液的配制
• 2.2.1.2 淫羊藿多糖的酸水稀释法研究
• 2.2.1.3 小结
• 2.2.2 相对吸收系数法研究初探
• 2.2.3 改良-差示酚硫法的研究
• 2.2.3.1 原理
• 2.2.3.2 改良-差示酚硫法的建立
• 2.2.3.3 改良-差示酚硫法的方法学研究
• 2.2.3.4 不同方法测定对未精制多糖样品含量测定的比较研究
• 2.2.4 不同样品中多糖含量的测定
• 2.3 本章小结
• 第3章 膜污染克服方法的研究及淫羊藿多糖制备
• 3.1 实验原料、试剂及仪器
• 3.2 实验方法及结果分析
• 3.2.1 淫羊藿提取液的制备
• 3.2.2 膜分离前预处理方法的研究
• 3.2.3 微滤操作条件对膜通量影响的研究
• 3.2.3.1 微滤实验前膜通量的测定
• 3.2.3.2 操作条件的考察
• 3.2.3.3 小结
• 3.2.4 不同预处理方法降低膜污染效果的比较
• 3.2.5 变压运行方式对膜通量的影响
• 3.2.6 膜的清洗与保存方法研究
• 3.2.6.1 碱水反冲清洗膜的研究
• 3.2.6.2 膜的保存
• 3.2.7 淫羊藿多糖的制备
• 3.3 本章小结
• 第4章 淫羊藿多糖除蛋白工艺研究
• 4.1 实验试剂及仪器
• 4.2 实验方法及结果分析
• 4.2.1 蛋白质含量测定方法的建立
• 4.2.1.1 蛋白质标准液的制备
• 4.2.1.2 考马斯亮蓝G-250溶液的制备
• 4.2.1.3 标准曲线的绘制
• 4.2.1.4 样品中蛋白质含量测定
• 4.2.2 蛋白去除率的计算方法
• 4.2.3 多糖损失率的计算方法
• 4.2.4 多糖除蛋白方法的研究
• 4.2.4.1 木瓜蛋白酶法除蛋白研究
• 4.2.4.2 Sevag法除蛋白研究
• 4.2.4.3 Sevag法和木瓜蛋白酶法除蛋白效果比较
• 4.2.5 多糖样品除蛋白实例
• 4.3 本章小结
• 第5章 淫羊藿活性成分综合利用制备工艺的研究
• 5.1 实验试剂及仪器
• 5.2 生物碱成分的提取及分析
• 5.2.1 实验方法
• 5.2.1.1 提取条件
• 5.2.1.2 生物碱定性分析实验
• 5.2.1.3 总生物碱的含量测定
• 5.2.2 生物碱实验结果及分析
• 5.2.2.1 定性分析实验结果
• 5.2.2.2 总生物碱含量测定结果
• 5.3 黄酮成分的提取及分析
• 5.3.1 实验方法
• 5.3.1.1 提取条件
• 5.3.1.2 黄酮成分定性分析实验
• 5.3.2 黄酮成分实验结果及分析
• 5.3.2.1 TLC分析结果
• 5.3.2.2 HPLC分析结果
• 5.4 本章小结
• 第6章 淫羊藿多糖不同提取方法的研究
• 6.1 实验试剂和仪器
• 6.2 实验方法及结果分析
• 6.2.1 热水提取方法的研究
• 6.2.1.1 提取方法及多糖得率的计算
• 6.2.1.2 热水提取条件的考察
• 6.2.2 超声提取方法的研究
• 6.2.2.1 提取方法及多糖得率的计算
• 6.2.2.2 超声提取条件的考察
• 6.2.3 两种方法提取淫羊藿多糖结果比较
• 6.3 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录