论文题目: 电针对老年性痴呆大鼠细胞凋亡相关基因调控机制的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 针灸推拿学
作者: 郭艳芹
导师: 孙忠人
关键词: 电针疗法,大鼠,学习记忆,细胞凋亡,氧化应激,基因调控
文献来源: 黑龙江中医药大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的: 研究电针对阿尔茨海默病（AD）大鼠学习记忆功能、抗氧化应激反应、细胞凋亡相关基因调控的影响,并探讨Aβ25-35诱导的AD大鼠神经细胞凋亡相关基因的变化。 方法: 将实验大鼠分为模型对照组、模型组、电针组、aFGF治疗组:采用侧脑室插管注射Aβ25-35的造模方法,建立AD痴呆动物模型;选取“百会”、“大椎”、“太溪”、“足三里”进行电针治疗。检测如下指标:Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;试剂盒检测脂质过氧化产物MDA、H2O2的含量和CAT活性;ICE,Bcl-2,Bax基因蛋白表达的Western blot检测;ICE、Bax、Bcl-2基因mRNA表达的RT-PCR检测;免疫组化分析海马凋亡相关基因的表达;HE染色法研究脑组织中凋亡细胞的形态学变化。以观察电针对AD大鼠学习记忆障碍、凋亡细胞、凋亡相关基因表达情况以及抗氧化应激反应的影响。 结果: 1、定位航行试验中,模型组大鼠平均逃避潜伏期较正常组明显延长,而电针组同模型组比较有显著缩短;空间探索试验中,电针组在乎台象限游泳距离百分比明显高于模型组。 2、电针治疗可以降低MDA和H2O2含量,增加CAT活性。抑制AD脑内发生的氧化应激反应 3、电针治疗能上调凋亡抑制基因Bcl-2在蛋白水平上的表达,下调凋亡促进基因Bax、ICE在蛋白水平上的表达。 4、电针治疗能上调凋亡抑制基因Bcl-2在mRNA水平上的表达,下调凋亡促进基因Bax、ICE在mRNA水平上的表达。 5、电针治疗能改善脑组织中凋亡细胞的形态学变化。 6、aFGF作为阳性对照组也能较好的改善AD的学习、记忆能力;降低Bax基因表达,增高Bcl-2基因表达。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
英文缩略词表
前言
文献综述
1.现代医学对老年性痴呆认识及治疗概况
1.1 阿尔茨海默病的研究简史
1.2 Aβ与AD
1.3 氧化应激反应与AD
1.4 AD动物模型的研究现状
1.5 Aβ神经毒性机制的细胞模型
1.6 aFGF与AD
2.祖国传统医学对老年性痴呆认识及治疗概况
2.1 中医古代文献对老年性痴呆的记载及描述
2.2 中医学对老年性痴呆病因病机的认识
2.3 针灸治疗老年性痴呆的分子生物学机理概述
实验一 电针治疗对老年性痴呆学习记忆、细胞凋亡基因调控的研究
1.实验材料
2.实验方法
2.1 动物分组及造模
2.2 电针腧穴方法
2.3 行为学检测方法
2.4 MDA、H_2O_2含量和CAT活性测定
2.5 ICE、Bax、Bcl-2表达RT-PCR检测
2.6 ICE，Bcl-2，Bax表达的Western blot检测
2.7 组织切片的制备
2.8 SABC免疫组化检测细胞内ICE、Bcl-2、Bax的表达
2.9 组织切片的HE染色
2.10 统计学处理
3.实验结果
3.1 动物一般状况
3.2 定位航行实验
3.3 空间探索实验
3.4 MDA、H_2O_2含量和CAT活性测定结果
3.5 ICE、Bax、Bcl-2 mRNA表达的RT-PCR检测结果
3.6 ICE、Bax、Bcl-2蛋白表达的Western blot检测结果
3.7 脑组织免疫组化结果
3.8 脑组织HE染色结果
4.讨论
4.1 模型评价
4.2 关于电针治疗的原则及处方
4.3 电针对AD大鼠空间学习记忆能力的改善作用
4.4 电针对AD大鼠氧化应激反应的影响
4.5 电针治疗AD大鼠细胞凋亡的基因调控机制
4.6 电针对AD大鼠海马形态结构的影响
4.7 aFGF对AD大鼠的治疗机制
5.小结
实验二 aFGF对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
1.实验材料
2.实验方法
2.1 细胞培养及凋亡模型的建立
2.1.1 细胞培养
2.1.2 Aβ_(25—35)储存液的配制
2.1.3 Aβ_(25—35)处理
2.1.4 MTT法检测细胞存活率
2.1.5 细胞荧光染色观察
2.1.6 DNA琼脂糖凝胶电泳分析
2.2 药物处理
2.3 MTT法检测细胞存活率
2.4 细胞凋亡的细胞核形态学检测
2.5 Bax、Bcl-2基因mRNA表达的RT-PCR检测
2.6 Bax、Bcl-2基因蛋白表达的Western blot检测
2.7 统计学处理
3.结果
3.1 Aβ_(23—35)诱导PC12细胞凋亡
3.1.1 Aβ_(25-35)剂量依赖性降低PC12细胞存活率
3.1.2 荧光染色结果
3.1.3 DNA断裂的凝胶电泳图谱分析
3.2 aFGF对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
3.2.1 aFGF对细胞存活率的影响
3.2.2 aFGF对Aβ_(25-35)的神经毒性具有保护作用
3.2.3 细胞凋亡的细胞核形态学改变
3.2.4 Bax、Bcl-2基因mRNA表达的RT-PCR检测
3.2.5 Bax、Bcl-2基因蛋白表达的Western blot检测
4.讨论
4.1 Aβ_(23—35)诱导PC12细胞凋亡
4.2 Aβ_(25-35)与Bax、Bcl-2
4.3 aFGF对Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用
5.小结
结论
问题与展望
致谢
参考文献
个人简历
附图
发布时间: 2005-09-15
参考文献
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