福建省橄榄（Canavium album Raeusch）种质资源的ISSR分析

论文摘要

橄榄（Canarium album Raeusch）属橄榄科（Burseraceae）橄榄属（Canarium L.）,是我国南方特产水果之一,已有2000多年的栽培历史。橄榄原产于中国,主要分布于广东、福建、台湾、四川、浙江、广西和海南等省。目前对橄榄的研究主要集中在栽培、生理、药用成分分析等方面,在分子生物学方面的研究较少。本研究以福建省60份橄榄遗传资源为材料,摸索出适合橄榄叶片基因组DNA的提取方法;建立并优化了橄榄ISSR反应体系;筛选出17条条带清晰,多态性好的ISSR引物;采用ISSR标记,结合聚类分析,进行了福建省橄榄遗传资源的亲缘关系与遗传多样性研究。为橄榄新品种的培育提供遗传背景,为橄榄种质资源的有效保护和合理利用提供科学依据。主要研究结果如下:1.橄榄富含酚类化合物和多糖等物质,易导致DNA提取和纯化困难。针对此问题,本研究采用改良CTAB法提取橄榄基因组DNA,数量和纯度均可满足ISSR分析要求,探索出一套操作简便、快速的橄榄DNA提取和纯化技术。2.建立了橄榄ISSR-PCR反应的技术体系。在20μL的反应体系中,采用40 ng的模板DNA,0.2 mmol/L dNTPs,0.25μmol/L ISSR引物,1 U Taq DNA聚合酶为橄榄1SSR-PCR扩增条件的最佳选择。按照此体系,在94℃预变性5 min,94℃变性30 s,最适退火温度退火60 s,72℃延伸90 s,40个循环,72℃延伸10 min。该体系扩增出的产物条带清晰易辨,效果良好,能够满足ISSR分析的要求。3.从96条ISSR随机引物中筛选出17条,对60个橄榄品种进行了ISSR-PCR扩增。共得到151条带,其中多态性条带有102条,多态性百分率为67.6%。同时研究中发现含（TC）n、（CA）n序列的ISSR引物在对橄榄DNA扩增时多态性水平较高,说明橄榄因组中富含（AG）n/（GT）n序列。4.对供试的橄榄品种进行聚类,分析结果表明:60份橄榄品种之间的遗传相似系数在0.819～0.991之间,揭示了不同橄榄品种之间的亲缘关系与遗传相似性。为以后有选择、有目的地引种、育种,缩短育种年限,提高育种效率奠定理论基础。5.分析的到橄榄种群的遗传分化系数为GST=0.2529,说明橄榄的遗传分化主要存在于种群内,种群间的分化较小。根据遗传分化系数估算的基因流的值是Nm=1.4773,大于1,表明种群间存在一定的基因交流。

论文目录

• 目录
• 英文缩略词表
• 摘要
• Abstract
• 1 综述
• 1.1 橄榄的研究进展
• 1.1.1 橄榄的历史与分布
• 1.1.2 橄榄的分类与植物学特征
• 1.1.3 橄榄的经济价值及药用价值
• 1.1.4 橄榄果实成分研究进展
• 1.1.5 橄榄的生产现状及发展前景
• 1.2 分子标记的种类与特点
• 1.2.1 RFLP
• 1.2.2 RAPD
• 1.2.3 AFLP
• 1.2.4 SSR
• 1.2.5 SCAR
• 1.2.6 ISSR
• 1.3 ISSR 在果树研究中的应用
• 1.3.1 品种分类和鉴定
• 1.3.2 遗传多样性研究
• 1.3.3 遗传图谱构建
• 1.4 存在问题及展望
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 主要仪器、试剂及溶液的配制
• 2.2.1 主要仪器设备
• 2.2.2 主要试剂
• 2.2.3 主要试剂的配制
• 2.3 方法
• 2.3.1 橄榄基因组DNA 的提取与纯化
• 2.3.2 橄榄基因组DNA 浓度及纯度的检测
• 2.3.3 橄榄ISSR-PCR 扩增反应体系的建立
• 2.3.4 ISSR-PCR 扩增
• 2.3.5 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 橄榄基因组DNA 的提取及检测
• 3.1.1 DNA 提取方法比较
• 3.1.2 橄榄样品DNA 质量检测
• 3.2 ISSR-PCR 扩增反应体系的优化
• 3.2.1 模板DNA 浓度对ISSR-PCR 反应的影响
• 3.2.2 dNTPs 浓度对ISSR-PCR 反应的影响
• 3.2.3 引物浓度对ISSR-PCR 反应的影响
• 3.2.4 Taq DNA 聚合酶浓度对ISSR-PCR 反应的影响
• 3.2.5 橄榄ISSR-PCR 反应体系优化正交试验结果
• 3.2.6 优化反应体系的确定
• 3.3 引物的筛选及退火温度的确定
• 3.3.1 ISSR 引物筛选
• 3.3.2 退火温度的筛选
• 3.3.3 引物最佳退火温度
• 3.4 橄榄品种的多态性分析
• 3.4.1 样品的多态性分析
• 3.4.2 聚类分析
• 3.5 遗传多样性分析
• 4 讨论
• 4.1 橄榄基因组DNA 提取
• 4.2 反应体系对PCR 结果的影响
• 4.2.1 DNA 模板对ISSR-PCR 扩增的影响
• 4.2.2 dNTPs 浓度对ISSR-PCR 扩增的影响
• 4.2.3 引物对ISSR-PCR 扩增的影响
• 4.2.4 Taq DNA 聚合酶浓度对ISSR-PCR 扩增的影响
• 4.2.5 退火温度对扩增的影响
• 4.3 反应体系优化方案的比较
• 4.4 橄榄的遗传多样性分析
• 4.5 亲缘关系探讨
• 4.6 遗传多样性保护
• 参考文献
• 附录
• 致谢