p16基因在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌发生发展中的作用

论文题目: p16基因在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌发生发展中的作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 普通外科

作者: 王兆文

导师: 彭志海,徐军明,陈国庆,李培明

关键词: 乙型肝炎病毒,肝硬化,肝细胞肝癌,基因,基因整合,蛋白,核因子,细胞周期,凋亡

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:本研究通过对原发性肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)、癌旁及肝硬化(Liver cirrhosis, LC)组织中乙型肝炎病毒(Hepatitis virus B, HBV)的感染状态、p16基因及其蛋白的表达改变、Rb (Retinoblastoma susceptibilitygene)蛋白表达和核转录因子κ B (Nuclear factor xappaB, NF-κ B)活性的检测,分析乙型肝炎病毒基因整合、p16基因改变、p16蛋白及Rb蛋白表达和NF-κ B结合活性之间的关系,并分析这些因素与肝细胞肝癌的关系,初步探讨p16基因的异常改变在HBV相关性肝细胞肝癌发生发展中的作用,为进一步研究HBV相关性肝细胞肝癌发生发展的分子生物学机制及利用p16基因进行肝细胞肝癌的预防、诊断和治疗提供部分实验依据。 方法:以35例原发性肝细胞肝癌手术切除标本及同时期35例肝硬化患者(后因标本量少减为31例)手术中活检组织为研究对象,标本分为三组,分别为肝细胞肝癌组、癌旁组及肝硬化组。三种组织标本由病理学专家进行常规病理学检查;以聚合酶链式反应(Polymerase chain reactions, PCR)检测三种组织中HBV DNA;以大片段DNA回收后PCR再扩增的方法检测组织中HBV DNA的X片段及S片段的整合状态;以Southern blot证实HBV-DNA是否整合;以聚合酶链式反应(PCR)检测三种组织中p16外显子1α及外显子2、3的纯合性缺失;聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(Polymerase chain reaction-single-strandconformation polymorphism, PCR-SSCP)检测p16基因外显子的突变;用甲基化修饰试剂盒及甲基化检测试剂盒检测p16基因的甲基化状态;以逆转录-聚合酶链式反应(Reverse transcfiptase PCR, RT-PCR)检测肝细胞癌、癌旁及肝硬化组织中p16基因mRNA的表达;用Western Blot检测肝细胞肝癌、癌旁及肝硬化组织中p16蛋白及Rb蛋白的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清甲胎球蛋白(Alpha-fetoprotein, AFP)的水平;以凝胶电泳迁移实验(ElectrophoreticMobility Shift Assays, EMSA)、竞争实验和超迁移实验检测组织中NF-κB转录活性。 结果:大部分肝硬化、癌旁和肝细胞癌组织中肝炎病毒仍然活跃复制,HCC、癌旁及LC组织中HBV DNA检出率分别为94.3%、91.4%及94.3%;三组HBV DNA整合率分别为71.4%、65.7%及60.0%,差异无显著性(P>0.05)。HCC组以X

论文目录:

中文摘要

英文摘要

前言

第一部分 原发性肝癌、癌旁组织及肝硬化组织中乙型肝炎病毒(HBV)基因整合状态研究

研究目的

材料与仪器

方法与步骤

结果

讨论

结论

第二部分 原发性肝癌、癌旁及肝硬化组织中p16基因改变的研究

研究目的

材料与仪器

方法与步骤

结果

讨论

结论

第三部分 p16 mRNA和蛋白表达改变与肝细胞癌发生的关系

研究目的

材料与仪器

方法与步骤

结果

讨论

结论

第四部分 p16／Rb蛋白表达和NF-κB活性的关系及其在肝细胞肝癌发生发展中的意义

研究目的

材料与仪器

方法与步骤

结果

讨论

结论

实验结果的图片

参考文献

全文总结

附录一 综述：抑癌基因p16与乙肝病毒相关性肝癌研究进展

附录二 英文缩略语及符号注释

附录三 在读期间书写论文、参加学术会议及获奖情况

附录四 致谢

发布时间: 2005-09-19

参考文献

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