论文摘要
目的:观察蛋白酶体抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂对T淋巴瘤细胞系凋亡、细胞增殖的影响,以及对NF-κB激活的影响。材料和方法:采用蛋白酶体抑制剂PS-341和组蛋白去乙酰化酶抑制剂CS055处理急性淋巴母细胞淋巴瘤细胞系Jurkat和皮肤T细胞淋巴瘤细胞系HuT78。分别应用Annexin V/PI双染法和MTT法观察两种药物单药和联合应用后的不同药物浓度作用下细胞凋亡和增殖的变化,采用Western Blot杂交观察用药后不同时间点细胞内凋亡相关蛋白表达的变化,包括细胞浆内的凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-9,以及NF-κB信号传导途径激活相关蛋白（细胞核内的p65）的变化。为了进一步探讨PS-341和CS055诱导细胞凋亡所依赖的信号传导途径,观察了应用非选择性caspase抑制剂z-VAD-FMK阻断caspase途径后再行用药时Jurkat和HuT 78细胞系凋亡的变化。以MTT增殖抑制实验的结果估计药物的GI50值。结果:PS-341和CS055在Jurkat细胞系中均具有诱导凋亡和抑制增殖的作用,用药后24小时的GI50分别为40nM和5μM。在MTT增殖抑制实验中发现两种药物联合有比较明显的协同作用。当与5μM的CS055联合应用时,PS-341的GI50值下降到2.5nM。PS-341和CS055均可诱导HuT 78细胞系发生凋亡,这种效应在用药后36小时开始显现,48小时后更加明显。随着用药时间的延长,PS-341和CS055诱导50%细胞凋亡的所需药物浓度分别从20nM和1.25μM下降到1.25nM和0.32μM。CS055作用于HuT 78细胞系48小时后的GI50值为20μM,PS-341单独应用未显示明显的增殖抑制效果,与0.32μM CS055联合应用时,PS-341的增殖抑制与单用CS055时相似。Western Bolt杂交实验显示PS-341 20nM单药、CS055 5μM单药及其联合应用均可在Jurakt细胞系中激活caspase-8和caspase-9,联合用药可抑制细胞核内p65表达。z-VAD-FMK可以阻断PS-341及其与CS055联合用药时诱导Jurkat细胞系发生凋亡的作用,但不能阻断CS055单药的促凋亡作用。PS-341 20nM、CS055 1.25μM单药及其联合应用于HuT 78细胞系后均未观察到caspse-9的激活,caspase-8的激活只见于CS055在用药后48小时。两种药物单独及联合应用时均有细胞核内p65表达下降,但以CS055单药的效果最明显。z-VAD-FMK可抑制PS-341和CS055诱导的HuT 78细胞系凋亡。结论:PS-341和CS055对Jurkat细胞系均有诱导凋亡和抑制增殖的作用,且对增殖抑制具有协同作用。PS-341和CS055对HuT 78细胞系均有促凋亡作用,但PS-341单独应用时对其增殖无显著抑制作用。PS-341和CS055联合应用可抑制Jurkat细胞系NF-κB信号传导途径的激活:二者单独和联合应用时均可抑制HuT 78细胞系NF-κB信号传导途径的激活,但CS055单独应用时效果更明显。CS055可通过非caspase依赖途径激活Jurkat细胞系发生凋亡。
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