化学合成siRNA对宫颈癌细胞SiHa中E6基因表达的抑制作用

论文摘要

目的:探讨体外化学合成的HPV（human papolloma virus）16 E6的siRNA对HPV16阳性的宫颈癌细胞系SiHa细胞中HPV16 E6基因的抑制作用和对SiHa细胞生物学行为变化的诱导作用。方法:化学合成三条针对HPV16 E6的siRNA序列,用脂质体法瞬时转染SiHa细胞。实验分两组:未转染组和siRNA转染组。用半定量RT-PCR（反转录—聚合酶链式扩增）技术分别检测未转染组及siRNA转染后24h,48h,72h时HPV16E6基因mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞活性,流式细胞技术（FCM）检测细胞周期变化,细胞免疫化学技术检测转染前后细胞中p53蛋白表达水平的变化,透射电镜观察转染前后细胞形态学变化。结果:1.3条siRNA均能有效抑制E6 mRNA的转录表达,以siRNA1作用效果最为明显。2.MTT检测结果显示20nmol/L、50nmol/L和80nmol/L终浓度转染后细胞增殖活性均有所下降,其中以50nmol/L转染时增殖活性下降最明显。3.流式细胞术检测结果显示转染后G0/G1期细胞数占生长周期细胞数的比例增多,即表现为G1期阻滞,S期细胞的比例降低。4.细胞免疫化学检测结果显示转染72 h后p53蛋白表达水平增高,转染前后差异有显著性（P＜0.05）。5.转染72 h后透射电镜下可见细胞细胞质浓缩,胞质中出现空泡。结论:化学合成siRNA可有效沉默SiHa细胞E6基因的转录表达,进而导致细胞生物学行为的改变。针对HPV16E6的RNAi有望成为宫颈癌基因治疗的一种新策略。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 第一章 HPV16型E6基因siRNA的选择与建立
• 1.1 仪器、试剂与耗材
• 1.2 实验方法
• 1.3.结果
• 1.4 讨论
• 参考文献
• 第二章 HPV16型E6基因siRNA沉默宫颈癌细胞后生物学性状的研究
• 2.1 仪器、试剂与耗材
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果
• 致谢