丙戊酸钠对中性粒细胞氧化代谢与机体氧化应激影响的研究

论文摘要

癫痫是小儿神经系统常见的慢性疾病,需长期甚至终生抗癫痫药物（AEDs）治疗。但长期AEDs治疗会导致各种不良反应。近来临床流行病学资料显示在长期AEDs治疗的成年癫痫患者中,动脉粥样硬化相关的心脑血管疾病患病率与死亡率增高,而动脉粥样硬化早期的血管病变以及高危因素可起始于童年期,并随年龄的增长而进展。同时学者们也发现AEDs的长期使用将导致脂质与氧化代谢紊乱,进而影响血管内皮细胞功能导致动脉硬化,但其机制尚未被阐明。氧化应激与机体多种细胞功能损伤和动脉粥样硬化关系密切；而中性粒细胞与心血管疾病的密切关系近来也备受关注,其作为炎症细胞可释放炎症介质与活性氧自由基等氧化活性因子（ROS）参与氧化应激,损伤血管内皮细胞。已有报道癫痫患儿予AEDs治疗可活化中性粒细胞,故AEDs是否通过活化中性粒细胞进而引起氧化活性因子的释放与氧化/抗氧化失衡,导致机体氧化应激损伤致一系列病变值得进一步地深入研究。研究目的1.探讨丙戊酸钠（VPA）引起癫痫患儿中性粒细胞活化率、中性粒细胞髓过氧化物酶MPO活性的变化特点；2.分析VPA对机体抗氧化酶系统超氧化物歧化酶SOD、过氧化氢酶CAT、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活性的影响；3.分析VPA对机体脂质过氧化代谢产物丙二醛MDA含量的变化及其意义；4.分析服药疗程、发作分类等相关因素对结果判断的影响,从而指导临床合理用药及辅助用药。对象与方法选择对照健康体检儿童30例与原发性癫痫患儿26例,对癫痫患儿进行随访,观察正常组与癫痫组患儿在用药前、VPA治疗6月、12月后各指标的变化并作相关与回归分析。根据DHR荧光染色法建立的中性粒细胞活性检测方法,用CELLquest软件在流式细胞仪上记录中性粒细胞荧光信号的gate值（活化率）和平均荧光强度,检测中性粒细胞活化率和刺激指数（SI）。采用化学比色法严格按照说明书操作测定血浆髓过氧化物酶（MPO）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性以及丙二醛（MDA）含量。采用Spearman法对与MDA含量相关的因素作相关分析并进行多元逐步回归分析。研究结果1.VPA对中性粒细胞活性的影响VPA治疗后患儿中性粒细胞活化率明显增高,刺激指数SI降低。VPA治疗后6月、12月患儿中性粒细胞的活化率分别为（11.50±6.52）%与（14.31±5.76）%,与对照组（5.90±3.77）%和治疗前（7.42±3.15）%相比差异均有统计学意义（P<0.01）。VPA治疗后6月、12月患儿中性粒细胞刺激指数S1分别为474.88±118.98与416.31±110.0,与对照组544.83±140.83和治疗前535.23±111.55相比差异有统计学意义（P<0.05）。2.VPA对中性粒细胞髓过氧化物酶MPO活性的影响VPA治疗后6月、12月时患儿血浆MPO活性分别为（28.26±8.99）U/L与（34.28±10.72）U/L,较对照组（20.87±7.52）U/L与治疗前（22.14±6.16）U/L显著升高（P<0.05或P<0.01）,且随治疗时间的延长其活性有增高趋势。本研究中各随访时间点中性粒细胞的活化率、SI以及血浆MPO活性在全身性发作和部分性发作患儿间差异无统计学意义。3.VPA对机体氧化应激指标的影响VPA治疗后6月、12月时患儿血浆SOD活性分别为（57.85±9.42）U/m1与（49.77±10.32）U/ml,较对照组（67.24±10.13）U/m1与VPA治疗前（62.54±8.43）U/ml显著降低（P<0.05或P<0.01）；CAT活性在VPA各治疗组分别为（6.23±1.37）U/ml与（5.97±1.48）U/ml,也均较对照组（7.65±1.90）U/ml与治疗前（6.97±2.06）U/m1显著降低（P<0.05或P<O.01）；但GSH-Px活性在治疗前后患儿间差异无统计学意义。4.VPA对机体脂质过氧化代谢的影响VPA治疗后6月、12月患儿血浆中MDA含量分别为（7.41±1.63）nmol／ml与（8.41±1.84）nmol／ml,较对照组（5.81±1.36）nmol／ml与治疗前（6.29±1.46）nmol/ml显著升高（P<0.01）。5.相关与回归分析结果对可能与血浆MDA含量相关的变量逐一进行相关性分析,结果MDA含量与服药疗程、中性粒细胞活化率、血浆MPO活性呈正相关性,相关系数分别为r=0.488、0.535与0.503（P<0.01）；与血浆SOD、CAT活性呈负相关性,相关系数分别为r=-0.552与-0.289（P<0.01）；其余因素如年龄、性别、癫痫发作类型、白细胞与中性粒细胞数等对氧化应激指标影响均无统计学意义。以患儿血浆MDA含量作为因变量,相关分析中有统计学意义的变量作为自变量进行多元逐步回归分析,结果显示服药疗程（X1）、中性粒细胞活化率（X2）与血浆SOD活性（X3）最终进入方程：Y=8.482+0.487*X1+0.077*X2-0.052*X3,调整R2=0.373,提示癫痫患儿氧化应激损伤与服药疗程和中性粒细胞的活化密切相关。结论1.VPA可致中性粒细胞活化且其活化率与VPA治疗疗程呈正相关2.VPA可致机体氧化应激损伤,其与中性粒细胞的活化呈正相关性3.VPA对中性粒细胞活性的影响可能与癫痫的发作类型无关

论文目录

• 中英文缩写对照
• 中文摘要
• abstract
• 前言
• 第一部分:VPA对癫痫患儿中性粒细胞活性影响的研究
• 研究对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分:VPA对机体氧化应激损伤指标影响的研究
• 研究对象和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 发表论文和参加学术活动
• 致谢
• 附录