表达载体介导的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵袭和转移的实验研究

表达载体介导的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵袭和转移的实验研究

论文摘要

目的:探讨Notch2在人骨肉瘤组织中的表达量及其意义;研究靶向沉默Notch2对骨肉瘤侵袭转移的作用机制。方法:(1)本实验我们通过免疫组化的方法来进行检测82例骨肉瘤组织中Notch2蛋白表达情况,并且结合其相关临床病理资料来分析Notch2的表达情况与其临床病理特征的关联性。(2)我们在试验中首先是构建全长的逆转录病毒pSUPER-Notch2-siRNA质粒载体,然后通过使其稳定性的转染到PT67细胞来进行培养后,来得到其分泌Notch2蛋白病毒血用来沉默入骨肉瘤细胞株MG63细胞中Notch2的表达来实现的;通过对人骨肉瘤细胞株的干预及其沉默人骨肉瘤细胞系(MG63),是通过下列方法来实现的:常用的方法是通过体外划痕实验、Transwell侵袭实验、MTT和流式细胞仪检测等检测方法,然后我们通过研究Notch2是如何影响骨肉瘤细胞分化增殖、骨肉瘤侵袭运动的分子机制验证Notch2调控骨肉瘤发生发展分子机制导致肿瘤生物学行为的改变。结果:(1)检测Notch2在骨肉瘤和骨软骨瘤中的表达情况一般来说Notch2蛋白的阳性表达主要体现在肿瘤细胞的细胞膜或细质,颜色一般是呈棕黄色,散在性的颗粒分布。82例骨肉瘤中有64例呈阳性表达,阳性率78.1%(64/82),对照组为17.6%(6/34),这两个组之间的差异还是具有和明显的(P<0.05)。Notch2在骨肉瘤中的表达明显高于在骨软骨瘤中表达,实验结果提示Notch2可能与骨肉瘤的发生发展确实有一定的关系。Notch2在骨肉瘤组织中的表达情况和其临床病理的关系Notch2蛋白表达与骨肉瘤组织组织分化程度、病理分期分级和有无转移有强的关联性(p<0.05),但是肿瘤的直径大小、性别、年龄、ALP(碱性磷酸酶)等与其关联性相对不明显(p>0.05)。(2) Notch2在MG63中的表达情况与骨肉瘤的侵袭转移能力是有很强的关联性Notch2 mRNA和蛋白在MG63中的表达结果显示:在MG63人骨肉瘤细胞株细胞中与对照组比较,Notch2 mRNA和蛋白表达水平分别0.86±0.09 vs0.47±0.05,0.76±0.04vs0.22±0.08,具有显著性差异(p<0.05)。(3) Notch2在逆转录病毒介导的小RNA干扰特异性沉默MG63细胞系中的表达情况Notch2在逆转录病毒介导的小RNA干扰特异性沉默MG63细胞系中的表达相对于而言对照组而言是十分明显的,其抑制效率71%(p<0.05),但是作为对照组的MG63Notch2RNAi-的表达较MG63细胞系试验中没有明显的改变,这个结果提示本研究中Notch2的表达是可以通过逆转录病毒介导的小RNA干扰来有效沉默MG63其量的表达来实现的。通过体外实验证实Notch2的表达可以影响骨肉瘤细胞的侵袭能力MG63Notch2RNAi+细胞迁移显下降,24小时划痕愈合率分别为52%vs75%,差异具有义(P<0.05)。我们在实验中通过Transwell侵袭小室测定法来检测出MG63Notch2RNAi+细胞在其干预后运动能力,结果也是显示MG63Notch2RNAi+细胞运动侵袭能力是下降很明显的,计数经过约24小时细胞培养后穿过Transwell膜的每低倍视野细胞数情况计数结果分别为32.67±5.3,显示其结果还是具有较强的差异性(P<0.05)。同时用MTT法来测定MG63Notch2RNAi+与其对照组的细胞增殖运动能力,结果分别为(10±1.4)%vs (18.30±2.3)%,分下后说明这两周差异还是很明显的(p<0.05)。结论:该实验提示Notch2在骨肉瘤中的高表达可能与骨肉瘤的发生发展还是有一定程度的联系的,有可能作为预测骨肉瘤不良预后的肿瘤标志物的;而且Notch2有可能通过其上下游的信号分子机制一定程度上是参与了骨肉瘤的侵袭转移的;我们希望Notch2有一天能够成为抗骨肉瘤转移治疗的新途径;本研究为我们骨肉瘤的临床RNAi治疗提供了一定程度上理论依据。

论文目录

  • 缩略词表
  • 中文摘要
  • ABSTRACT
  • 前言
  • 第一部分 Notch2在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞株MG63中的表达
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 第二部分 RNAiNotch2对骨肉瘤细胞增殖分化影响的体内外研究
  • 材料与方法
  • 结果
  • 讨论
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 攻读学位期间发表的文章
  • 致谢
  • References
  • 相关论文文献

    • [1].Notch信号通路配体基因在剥脱综合征中的表达及意义[J]. 新疆医学 2019(12)
    • [2].Notch基因与非酒精性脂肪性肝病的研究进展[J]. 国际消化病杂志 2020(01)
    • [3].Notch信号与少突胶质前体细胞增殖和分化的相关研究进展[J]. 重庆医科大学学报 2020(01)
    • [4].原发性胆汁性肝硬化患者外周血单核巨噬细胞中Notch受体表达情况[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2020(03)
    • [5].Notch signalling pathway in development of cholangiocarcinoma[J]. World Journal of Gastrointestinal Oncology 2020(09)
    • [6].Induction of apoptosis in renal cell carcinoma by cinobufotalin through inhibition of Notch1 signal activation[J]. Oncology and Translational Medicine 2020(05)
    • [7].Notch在中枢神经系统疾病中作用的研究进展[J]. 赣南医学院学报 2017(06)
    • [8].Notch信号通路参与急性移植物抗宿主病的研究进展[J]. 中国实验血液学杂志 2017(01)
    • [9].Notch基因通路与恶性肿瘤的进展[J]. 实用肿瘤学杂志 2017(01)
    • [10].烧伤创面内Notch信号因子变化临床研究[J]. 临床军医杂志 2017(04)
    • [11].雌激素缺乏对骨关节炎中Notch信号的影响[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2017(04)
    • [12].NOTCH信号在胸骨后甲状腺肿中的表达及其作用的研究[J]. 中国地方病防治杂志 2016(12)
    • [13].Notch受体在胃癌的表达及意义[J]. 江苏医药 2016(01)
    • [14].Notch信号通路与肝癌的研究进展[J]. 基础医学与临床 2016(04)
    • [15].Notch信号通路在头颈部肿瘤中的研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2014(12)
    • [16].Anti-tumor effect of the extract from Qingyihuaji formula on pancreatic cancer by down-regulating Notch-4 and Jagged-1[J]. Journal of Traditional Chinese Medicine 2015(01)
    • [17].Notch信号通路在骨肉瘤研究中的新进展[J]. 临床骨科杂志 2015(05)
    • [18].Knuckles & Notch:艺术书狂热分子[J]. 艺术与设计 2017(08)
    • [19].Notch-芳香烃受体-白细胞介素-22通路在急性特发性血小板减少性紫癜中的作用[J]. 免疫学杂志 2020(03)
    • [20].早期应用黄连解毒汤对多发性脑梗死动物模型认知功能及Notch信号通道的影响[J]. 吉林中医药 2020(06)
    • [21].切应力对脑血管内皮细胞Notch通路表达的影响[J]. 山西医科大学学报 2020(06)
    • [22].Notch信号在脂多糖诱导的骨髓间充质干细胞中的作用[J]. 中国病理生理杂志 2018(02)
    • [23].Notch通路在骨疾病领域的研究进展[J]. 解剖科学进展 2018(04)
    • [24].Notch信号通路与中枢神经系统疾病的研究进展[J]. 中国医药指南 2017(26)
    • [25].Notch4 Inhibition Suppresses Invasion and Vasculogenic Mimicry Formation of Hepatocellular Carcinoma Cells[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2017(05)
    • [26].The Ecdysone and Notch Pathways Synergistically Regulate Cut at the Dorsal-Ventral Boundary in Drosophila Wing Discs[J]. Journal of Genetics and Genomics 2016(04)
    • [27].细胞跨膜Notch配体4在非小细胞肺癌中的表达及意义[J]. 中国中西医结合外科杂志 2015(01)
    • [28].Notch信号通路与白血病干细胞的关系及研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2015(07)
    • [29].Notch信号通路在血管发生中的作用[J]. 医学综述 2015(07)
    • [30].Notch通路在骨肉瘤发病机制中的研究现状[J]. 中国矫形外科杂志 2015(09)

    标签:;  ;  

    表达载体介导的Notch2基因沉默抑制人骨肉瘤侵袭和转移的实验研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢