Ghrelin在正常及鸭肝炎病毒感染雏鸭体内分布的动态观察

论文摘要

目的:通过免疫组化的方法研究Ghrelin在1d-49d樱桃谷鸭各组织内的定位及分布规律,分析对照组与攻毒组各组织内Ghrelin分布及变化特点。为进一步认识机体如何保持内环境的稳定提供形态学基础。也有助于理解复杂的神经--内分泌--免疫网络的调控。方法:1d樱桃谷鸭200羽,按体重随机分为两组:对照组80羽（即正常组）,攻毒组120羽。在4d时,经腿部肌肉接种(0.1ml/羽,10-3.5LD50/0.2ml)鸭肝炎病毒;对照组相同部位注射（0.1ml/羽）生理盐水。处理后每天观察鸭群状态,记录发病情况及临床症状。对照组于1d、3d、5d、7d、9d、11d、14d、21d、28d、35d、42d、49d上午9点饲喂前随机取6羽,经颈静脉放血后剖杀,采取肝脏、腺、胸腺、法氏囊、脾脏、肝脏、胰脏、脑及垂体置入10%福尔马林中固定48h。试验组于5d、7d、9d、11d、14d、21d、28d、35d、42d、49d随机取6羽剖杀,取样、固定48h制作石蜡切片。石蜡切片厚度为4μm。将切片分为两套,一套做HE染色（粘片剂为蛋白甘油）,另一套做SABC染色（粘片剂为多聚赖氨酸）。结果:SABC染色结果:对照组,1d-49d垂体、胃、胰脏、脾脏、胸腺、法氏囊组织内均有棕黄色阳性细胞分布。此外,脾脏血管壁、胸腺及法氏囊的结缔组织中都有Ghrelin阳性细胞分布。不同组织内Ghrelin阳性细胞具有不同的形态特点,脾脏中的阳性细胞类型有浆细胞、单核细胞、淋巴细胞、血管平滑肌细胞;胸腺中的阳性细胞类型有树突状细胞、淋巴细胞、小梁平滑肌细胞;法氏囊内的阳性细胞类型仅见到小梁平滑肌细胞;腺胃内的阳性细胞类型是胃腺细胞;胰脏内的阳性细胞类型是胰岛细胞。垂体阳性细胞类型不确定。Ghrelin主要分布于细胞质,还分布于树突细胞、结缔组织平滑肌细胞、单核细胞细胞核内。阴性对照切片,未见到Ghrelin阳性细胞分布。不同组织阳性细胞着色的速度与深度也各异。其中,以胰脏、脾脏内的阳性细胞着色速度最快、颜色最深。试验组,Ghrelin阳性细胞分布的位置及细胞种类均与对照组相同。光密度值:对照组各组织内,阳性细胞的平均光密度值随着日龄的增长升高。试验组的变化与接毒后的时间的变化密切相关。各组织阳性细胞平均光密度值的变化趋势也各不相同。攻毒组5d,胸腺、法氏囊、脾脏组织阳性细胞的平均密度迅速升高,腺胃、胰脏组织的阳性细胞平均光密度值高峰形成较晚,垂体光密度值变化幅度不明显。H.E染色结果显示:攻毒组肝脏、胰腺、脾脏、肾脏等组织均有明显病变,其中肝脏的病变更明显。攻毒后24h,肝脏、脾脏、胸腺呈现出血、坏死性炎症病理变化,正常肝小板结构模糊甚至消失,脾脏红白髓分界不明显;接毒后48h,肝脏中可见炎性细胞浸润,脾脏白髓、胸腺及法氏囊滤泡髓质淋巴细胞显著减少。接毒后72h,肝脏胆小管和脾小体增生等。结论:在生理状态下,鸭垂体、胃、胰脏、脾脏、胸腺、法氏囊均有Ghrelin阳性细胞分布。此外,脾脏血管壁、胸腺、法氏囊的结缔组织中均有Ghrelin阳性细胞分布。呈现明显的组织特异性。随日龄增大,各组织内Ghrelin阳性细胞平均光密度值呈上升趋势。感染鸭肝炎病毒后,各系统和组织Ghrelin阳性细胞平均光密度值随病程发展而变化。攻毒组5d,胸腺、法氏囊、脾脏组织阳性细胞的平均密度迅速升高,腺胃、胰脏组织的阳性细胞平均光密度值高峰形成较晚,垂体平均光密度值变化幅度不明显。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词（ABBREVIATION）
• 前言
• 1 GHRELIN概述
• 1.1 Ghrelin的发现
• 1.2 Ghrelin的分子结构
• 1.3 Ghrelin的组织分布
• 1.4 Ghrelin分泌的影响因素
• 1.5 Ghrelin的作用
• 2 鸭肝炎概述
• 2.1 鸭肝炎的发病特点
• 2.2 鸭肝炎疾病危害
• 2.3 鸭肝炎的临床症状和病理变化
• 2.4 鸭肝炎的病毒分布
• 研究目的及意义
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验动物
• 1.1.2 毒株准备及主要试剂
• 1.1.3 仪器设备
• 1.2 方法
• 1.2.1 病毒处理
• 1.2.2 动物分组及处理
• 1.2.3 样品采集与处理
• 1.2.4 切片制作
• 1.2.5 SABC染色
• 1.2.6 染色结果观察
• 1.2.7 数据统计与处理
• 2 实验结果与分析
• 2.1 临床症状及死亡情况
• 2.2 鸭肝炎剖检症状
• 2.3 鸭肝炎病毒感染鸭病理变化结果
• 2.4 Ghrelin的组织分布定位结果
• 2.5 Ghrelin阳性细胞平均光密度值（Mean±SD）
• 3 讨论
• 3.1 Ghrelin的组织分布
• 3.2 Ghrelin阳性细胞平均光密度值的变化趋势
• 3.3 鸭肝炎症状与Ghrelin阳性细胞平均光密度值的关系
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录