论文摘要
目的:探讨超声联合脂质体介导重组型Caspase3基因转染宫颈癌细胞的可行性及重组型Caspase3对宫颈癌细胞凋亡的诱导作用。方法:以不同声强的脉冲超声作用于Ca Ski细胞不同时间,找出可使外源物质进入细胞的最佳作用强度及时间。将筛选出的超声条件作用于细胞进行实验,Ca Ski细胞随机分成5组:Ⅰ组单纯细胞组、Ⅱ组超声+质粒组、Ⅲ组超声+质粒+脂质体组、Ⅳ组质粒+脂质体组、Ⅴ组单纯质粒组。（1）采用MTT法观察各组细胞的生长抑制情况;（2）采用Hoest33258染色法检测各组细胞的凋亡形态学改变;（3）采用流式细胞仪（Flow cytometry, FCM）分析各处理因素对细胞周期分布的影响;（4）采用RT-PCR实验检测各组细胞mRNA的表达情况。结果:筛选出的理想超声条件是声强:0.8w/cm2,作用时间25s左右。（1）MTT结果显示超声+质粒组、超声+质粒+脂质体组、质粒+脂质体组细胞均有明显生长抑制作用,而其中超声+质粒+脂质体组的增殖抑制作用最为明显,与其它各组比较差异具有显著性意义（P<0.05）。（2）Hoest33258荧光染色结果提示:重组型Caspase3有明显的促细胞凋亡作用,细胞核碎裂浓染;各组细胞凋亡率为:单纯细胞组（0.7±0.57）%、超声+质粒组（3.8±1.32）%、超声+质粒+脂质体组（14.2±1.55）%、质粒+脂质体组（11.5±1.78）%、单纯质粒组（0.4±0.53）%。超声+质粒+脂质体组与其它各组相比,差异具有显著性意义（P<0.05）。（3）FCM结果显示超声+质粒+脂质体组及质粒+脂质体组处理24小时后细胞周期分布发生明显变化,主要表现为G0/G1期细胞比例减少,S期和G2/M期细胞比例均增加,其中超声+质粒+脂质体组细胞比例变化最显著（P<0.05）。超声+质粒组细胞周期变化主要为G2/M期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例减少。（4）RT-PCR实验结果显示:超声+质粒+脂质体组及质粒+脂质体组均有重组型Caspase3基因的mRNA的表达,且超声+质粒+脂质体组灰度值与其它各组比较,差异有显著性意义（P<0.05）。结论:超声联合脂质体转染宫颈癌细胞较单纯超声或脂质体转染效率高;重组型Caspase3能在宫颈癌细胞中表达,且能明显地诱导细胞凋亡,对癌细胞的基因治疗具有理论意义。
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