根癌农杆菌介导WIN1基因在甘蓝型油菜中的转化

论文摘要

油菜是世界上比较古老的油料作物,也是我国种植面积最大的油料作物,在中国和印度等地具有悠久的种植历史。目前油菜已成为世界上四大油料作物（大豆、向日葵、油菜、花生）之一,20世纪80年代以来,油菜作为重要的植物油源和饲料源,发展速度非常快。但全球水资源短缺现象致使较为严重的干旱状况,其问题在中国表现比较严重,也已成为全球关注的主要问题,因此,培育出抗旱油菜成为当下我国油菜生产的一项研究任务。随着转基因技术的飞速发展,为生物定向改造和分子育种提供了最有效的方法,目前转基因技术有农杆菌介导法、电激法、聚乙二醇（PEG）法、显微注射法、花粉通道法、基因枪法、离子束介导法等,而农杆菌是遗传转化中比较常用首选的方法,因其操作简单,成本低廉,也是目前使用最广泛的一种遗传转化方法。本研究中以中油821作为试验材料,主要就影响其转化效率的因素Kan的筛选浓度、菌液的浓度及浸染时间、共培养时间、乙酰丁香酮AS是否添加和硝酸银对转化的影响等几个方面对其进行了分析,创造了高效的农杆菌介导的遗传转化系统。采用根癌农杆菌方法将控制角质膜厚度的SHN1/WIN1基因转化到甘蓝型油菜细胞中,目的是防止油菜自身体内水分过度蒸腾散失,保持体内水分的平衡,以此来提高油菜抗旱、抗寒和抗病能力,为提高油菜抗逆性。柴凌燕于2009年构建的植物表达载体PBI121-SHN1/WIN1,为本研究植物表达载体PBI121-SHN1/WIN1导入农杆菌LBA4404奠定了基础,通过农杆菌介导法将目的基因SHN1/WIN1导入油菜细胞中,从而得到抗旱的转基因油菜中油821。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 综述
• 1.1 植物基因工程的研究
• 1.2 油菜基因工程概况
• 1.3 转基因作物存在的主要问题及展望
• 1.4 蜡质基因的研究及应用
• 1.4.1 蜡质基因的发现
• 1.4.2 蜡质基因的研究及应用
• 1.5 本研究的研究背景、目的意义及主要内容
• 1.5.1 本研究的研究背景、目的意义
• 1.5.2 研究的主要内容
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 植物材料
• 2.1.2 菌株和质粒
• 2.1.3 培养基
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂及其配制
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 无菌苗的选取
• 2.4.2 农杆菌的培养
• 2.4.3 杆菌介导的遗传转化体系的建立
• 2.4.4 外植体再生体系的建立
• 2.4.5 阳性苗的生根与移栽
• 2.4.6 转基因植株的分子检测
• 2.4.7 PCR反应体系
• 2.4.8 PCR扩增产物的检测
• 3 结果和分析
• 3.1 卡那霉素（Kan）浓度对带柄子叶分化的影响
• 3.2 菌液浓度与侵染时间对转化的影响
• 3.3 共培养时间对遗传转化的影响
• 3.4 乙酰丁香酮（AS）对转化的影响
• 3对转化的影响'>3.5 AgNO₃对转化的影响
• 3.6 转基因油菜获得及培育过程
• 3.7 转基因油菜的鉴定
• 4 讨论与结论
• 4.1 讨论
• 4.1.1 外植体的选择及预培养时间
• 4.1.2 卡那霉素的筛选
• 4.1.3 农杆菌的侵染
• 4.1.4 共培养及延迟培养的时间
• 4.1.5 硝酸银对转化外植体的影响
• 4.2 结论
• 参考文献
• 附录A 英文缩略词
• 致谢
• 个人简历
• 在校期间发表论文