导读:本文包含了耐药细胞系论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:白血病,肝细胞生长因子,骨髓间充质干细胞,儿童
耐药细胞系论文文献综述
马玉花,邹亚伟,彭盛,卢婕伦,黎波[1]（2019）在《MSCs分泌的肝细胞生长因子对人髓系白血病细胞系K562及其耐药株K562/G01增殖及药物敏感性的影响》一文中研究指出目的研究骨髓造血微环境中间充质干细胞(MSCs)分泌的肝细胞生长因子(HGF)对人白血病细胞K562及其耐药珠K562/G01细胞增殖及药物敏感性的影响。方法采用细胞贴壁法获取MSCs,选用人慢性髓系白血病急性红白血病变细胞系K562及其耐药系K562/G01。K562、K562/G01细胞分别与白血病患儿MSCs黏附共培养,实验组为加HGF抗体组,对照组加入等量培养液,通过显微镜观察白血病细胞在MSCs层上的黏附情况并计算黏附率,MTT法检测白血病细胞增殖情况,流式细胞仪测定白血病细胞周期。在共培养各组中加入伊马替尼孵育48 h后,流式细胞仪检测白血病细胞凋亡率。结果实验组中MSCs对K562和K562/G01细胞的黏附率分别为32. 4%±3. 2%和38. 1%±4. 8%,均分别低于对照组的51. 6%±3. 6%和62. 2%±4. 9%(P<0. 05)。实验组中K652和K562/G01细胞的A值分别为(0. 310 2±0. 039 0)和(0. 324 6±0. 035 8),均分别低于对照组的(0. 521 6±0. 046 7)和(0. 590 8±0. 003 4)(P<0. 05)。实验组中K652及K562/G01细胞处于G0/G1期的细胞比例均高于对照组,而处于S期的细胞比例低于对照组(P<0. 05)。加入伊马替尼孵育48 h后白血病细胞凋亡情况:实验组中存活细胞比例低于对照组中存活细胞比例(P<0. 05)。结论 HGF可通过影响细胞黏附及细胞周期促进K562及K562/G01细胞存活与增殖,并降低伊马替尼对白血病细胞的杀伤作用。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年12期）
郭野[2]（2019）在《SALL4基因表达与急性髓细胞白血病细胞系KG1a耐药相关性研究》一文中研究指出目的探讨SALL4基因与急性髓细胞白血病耐药的相关性。方法通过RNA干扰技术将表达SALL4干扰序列的质粒载体转染至急性髓细胞白血病细胞系KG1A中,建立抑制SALL4基因的表达体系。在此条件下,通过MTS细胞增殖检测法检测SALL4基因抑制前后对阿霉素和柔红霉素的耐药情况。结果实时荧光定量PCR结果显示,SALL4的干扰效率良好。在此干扰体系下,不同浓度化疗药物阿霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)作用时,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(62.80±1.64)%、(26.80±2.68)%、(18.00±2.00)%]显着低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(85.40±4.03)%、(56.80±5.06)%、(26.50±4.50)%],差异有统计学意义(t=-22.6、-30.4、-8.6,均P<0.05)。不同浓度化疗药物柔红霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)的作用下,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(42.00±1.87)%、(28.00±1.22)%、(21.60±2.51)%]也显着低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(61.00±1.87)%、(40.20±2.68)%、(27.00±1.22)%],差异有统计学意义(t=-18.8、-12.2、-5.4,均P<0.05)。结论 SALL4基因的表达是急性髓细胞白血病产生耐药的正性调节因素。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年22期）
苗留飞,杨阳,余柏增,张家勋,李晓军[3]（2019）在《叁代EGFR-TKI奥希替尼(AZD9291)耐药细胞系建立及耐药标志预测分析》一文中研究指出目的建立叁代表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)奥希替尼耐药细胞系(PC9-OR)并分析其耐药标志。方法浓度梯度递增构建奥希替尼耐药PC9细胞系(PC9-OR)。利用生物信息学分析AZD9291耐药细胞株表达谱芯片和测序数据筛选出耐药细胞高表达基因;荧光定量PCR验证表达;Logistics构建回归诊断模型并用ROC曲线验证其诊断效能。结果成功构建PC9-OR耐药细胞株,对3组独立PC9-OR细胞表达谱数据生物信息分析,发现19个基因表达在至少两个数据集中表达上调,3个基因在3个耐药细胞数据集表达均上调。荧光定量PCR检测PC9-OR细胞耐药相关基因有11个表达上调。Logistics回归显示5个基因诊断效能较好,ROC联合诊断模型显示曲线下面积0.985。结论构建了叁代EGFR-TKI奥希替尼耐药细胞系PC9-OR,发现一组基因可以作为EGFR-TKI耐药的标志,可能为临床及时发现EGFR-TKI耐药提供依据。(本文来源于《现代检验医学杂志》期刊2019年05期）
刘家铭,张静雯,司望利[4]（2019）在《下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响》一文中研究指出目的:探讨下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹技术(Western blot)的方法检测胃癌及癌旁正常组织中PHLDB3的表达(分别是20对和10对);qRT-PCR和Western blot检测PHLDB3在胃癌细胞系SGC7901以及胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染PHLDB3 siRNA后SGC7901/ADR的半数抑制浓度(IC_(50))值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示:PHLDB3在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.000 1);PHLDB3在耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901(P<0.000 1和P<0.05)。Western blot结果显示:相对于转染PHLDB3 negative control(NC)组,转染PHLDB3 siRNA组的SGC7901/ADR细胞中PHLDB3的表达降低(P<0.005)。MTT结果显示:SGC7901与SGC7901/ADR的IC_(50)值分别为(1.5±0.1)μg/ml与(5.5±0.2)μg/ml(P<0.000 1);SGC7901/ADR转染PHLDB3 siRNA后对顺铂的IC_(50)值明显下降(P<0.05)。流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测凋亡,结果显示:下调PHLDB3的表达后,SGC7901/ADR细胞的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:PHLDB3能够促进胃癌细胞系SGC7901/ADR产生多药耐药。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年17期）
梁毅舟[5]（2019）在《青蒿琥酯对人唾液腺腺样囊性癌耐药细胞系SACC-83/DDP抑制及耐药逆转作用的研究》一文中研究指出目的:利用顺铂诱导构建人唾液腺腺样囊性癌耐药细胞系,检测青蒿琥酯(Artesunate,ART)对耐药细胞的影响,研究ART对耐药细胞系耐药性的影响及其可能的作用机制。方法:以人唾液腺腺样囊性癌细胞系SACC-83为亲本,采用高浓度顺铂短期作用及低浓度顺铂长期维持并周期性作用的方法,构建顺铂耐药细胞系SACC-83/DDP。通过CCK8法检测浓度梯度的DDP作用于两种细胞时的IC50值计算耐药细胞系SACC-83/DDP的DDP耐药指数;通过CCK8法绘制两种细胞生长曲线,比较两种细胞增殖能力。平板克隆实验比较SACC-83/DDP及SACC-83细胞间克隆能力的差异。细胞划痕实验检测亲本与耐药细胞间细胞迁移能力的差异。免疫细胞化学法检测SACC-83/DDP及SACC-83细胞中MDR-1及survivin蛋白的表达水平差异;免疫荧光染色法检测SACC-83/DDP与SACC-83细胞中GSTπ及Bcl-2蛋白的表达水平差异;实时荧光PCR法检测SACC-83/DDP与SACC-83细胞中MDR-1,GSTπ,survivin及Bcl-2基因表达的差异。Western Blot法检测SACC-83/DDP与SACC-83细胞中MDR-1,GSTπ蛋白表达的差异。CCK-8法检测浓度梯度组青蒿琥酯作用于体外培养的人腺样囊性癌耐药细胞系SACC-83/DDP后细胞存活情况的变化,绘制生存曲线并筛选后续实验的合适ART用药浓度;CCK8法检测低浓度ART与浓度梯度DDP联用48 h后SACC-83/DDP及SACC-83细胞生存率的改变;通过免疫细胞化学法检测不同浓度ART作用48 h后SACC-83/DDP细胞中MDR-1及survivin蛋白的表达水平改变;免疫细胞荧光染色法检测不同浓度ART干预耐药细胞SACC-83/DDP 48 h后细胞中GSTπ及Bcl-2的蛋白表达水平改变;实时荧光PCR法检测含有不同浓度青蒿琥酯的完全培养液作用48 h后,耐药细胞系SACC-83/DDP细胞中MDR-1,GSTπ,survivin及Bcl-2表达的变化。Western Blot法检测含有浓度梯度ART的完全培养液培养48 h后SACC-83/DDP细胞中MDR-1,GSTπ及Bcl-2蛋白表达的差异。结果:1.历经8个月共七次使用DDP干预,以人颌下腺腺样囊性癌细胞系SACC-83为亲本细胞构建具有稳定耐药性的耐药细胞系SACC-83/DDP。与亲本细胞SACC-83相比,耐药细胞SACC-83/DDP细胞的生长速度、克隆形成率以及细胞迁移能力无明显差异。2.CCK8结果显示相同浓度梯度DDP作用于SACC-83/DDP细胞48 h后细胞生存率高于SACC-83细胞,通过两者IC50值计算得出,SACC-83/DDP对DDP耐药指数为2.38,属于低等耐药。同时,SACC-83/DDP也对博来霉素及长春新碱等其他种类化疗药物也产生了不同程度的耐药,耐药指数分别为2.33及1.64,可初步判定SACC-83/DDP具有一定程度的多药耐药性。3.免疫细胞化学实验结果显示,与亲本细胞SACC-83相比,SACC-83/DDP细胞中MDR1及survivin蛋白表达呈上调趋势,两者差异具有统计学意义。免疫细胞荧光结果显示,SACC-83/DDP细胞中,GSTπ及Bcl-2蛋白表达较SACC-83细胞上调,差异有统计学意义。PCR结果显示,SACC-83/DDP细胞中,MDR1,GSTπ,survivin及Bcl-2的m RNA表达较SACC-83细胞上调,差异具有统计学意义。Western Blot结果显示SACC-83/DDP细胞中,MDR1及GSTπ的蛋白表达较SACC-83细胞上调,差异具有统计学意义。4.CCK8结果显示:青蒿琥酯对SACC-83/DDP与SACC-83细胞均有抑制作用,ART对两种细胞的抑制能力无明显差异且抑制率呈药物浓度依赖,ART作用于SACC-83/DDP的IC50为458.36±27.35μmol/L。青蒿琥酯对SACC-83/DDP顺铂耐药性有一定程度的逆转作用,当青蒿琥酯药物浓度为30μmol/L时,耐药逆转指数为1.76。5.免疫细胞化学法结果显示,与不加ART的空白对照组相比,采用浓度为30,60,120,240,480μmol/L的ART作用耐药细胞SACC-83/DDP 48h后,细胞中MDR1及survivin蛋白表达均呈下调趋势,且其下调趋势呈药物剂量依赖,差异均有统计学意义。免疫细胞荧光结果显示,与不加ART的空白对照组相比,30,60,120,240,480μmol/L的青蒿琥酯干预耐药细胞SACC-83/DDP 48 h后,细胞中GSTπ及B-cl2蛋白表达下调,且其下调趋势呈药物剂量依赖,差异均有统计学意义。PCR结果显示,采用30,60,120,240,480μmol/L的ART作用于耐药细胞SACC-83/DDP 48 h后,SACC-83/DDP细胞中MDR1,GSTπ,survivin及Bcl-2的m RNA表达较不加ART的空白对照组下调,且其下调趋势呈药物剂量依赖,差异均具有统计学意义。Western Blot结果显示采用浓度为30,60,120,240,480μmol/L的浓度梯度组的青蒿琥酯作用于耐药细胞SACC-83/DDP 48 h后,SACC-83/DDP细胞中MDR1,GSTπ及Bcl-2的蛋白表达较空白对照组下调,且其下调趋势呈药物剂量依赖,差异均具有统计学意义。结论:1.本实验构建的SACC-83/DDP细胞与其亲本细胞SACC-83相比,具有一定的耐药性,耐药指数为2.38,属于低等耐药。与亲本细胞SACC-83相比,耐药细胞SACC-83/DDP克隆形成率、细胞生长速度及迁移能力无明显差异。SACC-83/DDP细胞MDR1,GSTπ,Bcl-2及survivin的m RNA及蛋白表达较SACC-83上调,可能与SACC-83/DDP产生耐药性的机制有关。2.ART对SACC-83/DDP细胞具有抑制作用,且其抑制作用呈药物浓度依赖。同时ART可在一定程度上逆转SACC-83/DDP的顺铂耐药性,在ART浓度为30μmol/L时,顺铂耐药逆转指数为1.76。采用浓度梯度ART作用于SACC-83/DDP细胞48 h后细胞中MDR1,GSTπ,Bcl-2及survivin的m RNA及蛋白表达与不加ART的空白对照组相比均呈下调趋势,且其下调趋势呈药物剂量依赖,上述相关因子表达的变化与青蒿琥酯对SACC-83/DDP细胞抑制及耐药逆转作用相关。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-06-01）
方宗宇[6]（2019）在《儿童B-ALL微小残留病变检测的关键标志研究及Ph~+ B-ALL伊马替尼耐药细胞系的建立》一文中研究指出目的:(1)分析目前临床实验室中常用的急性B淋巴白血病(B-ALL)微小残留病变(MRD)检测的抗体,根据各种抗体的检出率差异,优化抗体组合,为临床流式检测B-ALL MRD提供参考。(2)构建稳定的对伊马替尼(IM)耐药的费城染色体阳性(Ph~+)B-ALL细胞株,为其耐药机制研究提供细胞模型。方法:(1)研究对象为2015年9月至2018年7月于贵州医科大学第一附属医院接受正规化疗的74例B-ALL患儿。采用5种抗体组合(B1:CD34/CD10/CD45/CD19/CD20/CD38,B2:cTdT/CD34/CD45/CD19,B3:CD81/CD10/CD45/CD19,B4:CD58/CD123/CD45/CD19,B5:CD34/CD13+CD33/CD45/CD19)对B-ALL患儿进行MRD检测,检测其白血病相关免疫表型(LAIP)。(2)采用IM小剂量浓度递增间歇诱导Ph+B-ALL细胞株(SUP-B15细胞),建立Ph~+B-ALL耐药细胞株模型(SUP-B15/IM),分别用CCK-8法检测细胞对药物的耐药性,用流式细胞术(FCM)检测IM对细胞凋亡的诱导作用,用RT-PCR检测细胞相关耐药基因的表达。结果:(1)B细胞发育成熟阶段表达的抗体CD20与B细胞发育早期阶段表达的抗体CD10、CD34、CD38联合应用对MRD的检测有较强的效用,检出率高达92.5%。CD10/CD81和CD34/cTdT检出率为75.9%和60.2%,CD123单独检出率也较高,占54.6%。然而,CD58和CD13+CD33检出率只占38.1%和41.6%,且在这叁个抗原表达异常的病例中,都伴随有其它LAIP,(2)成功建立SUP-B15/IM多药耐药细胞株,其对IM的耐药指数为12.3。用100μmol/L IM刺激细胞24h后,对照组SUP-B15/C细胞的凋亡率远大于耐药组SUP-B15/IM细胞(P<0.001)。与未加药细胞相比,100μmol/L IM作用于SUP-B15/IM细胞24h后细胞中MDR1基因和MRP5的表达水平均显着上调(P<0.001)。结论:(1)在流式细胞仪荧光通道有限时,可以考虑舍弃CD58和CD13+CD33叁个抗体,并根据实际荧光通道数量使用检出率高的CD34,CD10,CD45,CD19,CD20,CD38,CD81,CD123和cTdT抗体进行组合。(2)成功构建了耐IM的Ph+B-ALL细胞株SUP-B15/IM,可做为Ph+B-ALL对化疗药物耐药机制研究的体外模型。(本文来源于《贵州医科大学》期刊2019-05-01）
邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光[7]（2018）在《人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立》一文中研究指出目的建立稳定高表达人转录因子21(TCF21)基因的肺腺癌顺铂耐药细胞系(A549/DDP)。方法从人肝癌细胞Hep G2中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得人TCF21基因的c DNA,并构建p EGFP-N1-TCF21真核表达载体;用脂质体转染A549/DDP细胞,经G418筛选获得稳定表达人TCF21基因的细胞系;运用RT-PCR、Western-Blot技术对细胞系进行鉴定。结果成功构建了人TCF21基因真核表达载体,建立了能够稳定高效表达人TCF21基因的A549/DDP细胞系。结论 TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染A549/DDP细胞系的建立为探究其逆转人肺腺癌细胞耐药的作用及其分子机制奠定了坚实的实验基础。(本文来源于《现代预防医学》期刊2018年14期）
谢简明[8]（2018）在《依布硒啉阻滞及逆转HIF-1α在A549细胞系中介导的多药耐药的研究》一文中研究指出目的:探讨人A549细胞系耐顺铂的形成机制,依布硒啉(ebselen)对A549细胞系多药耐药(MDR)的阻滞作用及途径,依布硒啉对A549/DDP细胞的多药耐药性的逆转,及低氧诱导因子-1a(hypoxia inducible factor-1a,HIF-1a)在依布硒啉阻滞及逆转顺铂所致的多药耐药机制中的作用。方法:将不同浓度的顺铂、依布硒啉作用于A549、A549/DDP细胞,测定细胞形态及各项生化指标,检测相关蛋白表达水平及多药耐药基因异同。采用MTT检测法测定细胞活力,半数抑制率。细胞形态变化用倒置显微镜观察,划痕作为肿瘤迁移率的判断。ROS含量用DCFH-DA探针法测定,谷胱甘肽过氧化物酶活力用GSH-PX试剂盒检测,凋亡用hoechst 33342检测,P-gp、HIF-α荧光定位用免疫荧光标记法,P-gp、HIF-1α、Akt、PI3K、Bax、Bcl-2、E-cadherin、Caspase-3蛋白的表达水平用免疫印迹法检测。在A549细胞中,用二氯化钴营造低氧模型,雌二醇干扰HIF-1a,观察HIF-1a、P-gp蛋白在细胞中的表达的差异。在A549/DDP细胞中,采用PCR检测基因水平;siRNA干扰HIF-1α,免疫荧光检测HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平。结果:A549细胞随着顺铂浓度的升高而损伤加重,并有一定剂量依赖性。同时,损伤的A549细胞内活性氧类物质含量明显提高,细胞活力下降,皱缩变圆出现凋亡。此外,顺铂可使A549细胞P-gp、HIF-1a、Akt、PI3K蛋白表达上调,HIF-1a从胞质向细胞核聚集转位;E-cadherin下调,迁移率增加,Bax/Bcl-2比例增加,凋亡细胞增多。氯化钴上调HIF-1a表达,不改变P-gp含量。雌二醇干扰HIF-1a后,A549细胞中HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平明显下降。顺铂同4mmol·L~(-1)的依布硒啉合用,细胞迁移率降低,细胞凋亡数增加,活性氧降低,HIF-1α、P-gp降低,Caspase-3增加,Bax/Bcl-2比例升高,E-cadherin增加。依布硒啉降低A549/DDP细胞中的活性氧,降低了P-gp、HIF-1α蛋白的表达水平。依布硒啉与顺铂合用时使Caspase-3蛋白上调,Bax/Bcl-2比值增大。在A549/DDP细胞中,si RNA干扰HIF-1a后,细胞中HIF-1a,P-gp的表达明显下降;4mmol·L~(-1)依布硒啉可以大幅度降低ROS含量,下调HIF-1a,P-gp的蛋白表达水平;与顺铂合用,4mmol·L~(-1)依布硒啉能明显抑制细胞活力,其半数抑制率所需顺铂浓度降低。结论:顺铂可剂量性致使A549细胞中ROS升高,导致HIF-1α、P-gp的上调,进而对药物耐受。加入顺铂的同时加入依布硒啉,通过降低A549细胞内的ROS、HIF-1α,阻滞其耐药性的形成,协同顺铂所致的凋亡效应,并抑制肿瘤迁移发生。依布硒啉能打破A549/DDP细胞内的活性氧稳态,降低HIF-1α的稳定性,减少P-gp的表达,从而达到肿瘤多药耐药性的逆转。(本文来源于《江苏大学》期刊2018-06-01）
杨璇[9]（2018）在《大黄素甲醚逆转白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的研究》一文中研究指出目的:本文旨在评价大黄素甲醚对慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)耐药细胞系K562/ADM多药耐药的逆转作用及其机制。方法:1.细胞培养:采用肿瘤细胞体外培养技术培养CML细胞系K562细胞与耐药细胞系K562/ADM细胞。2.CCK8(cell counting kit-8,CCK8):检测(1)K562细胞与K562/ADM细胞之间的耐药倍数;(2)不同浓度的大黄素甲醚药物干预后K562/ADM细胞的细胞活性;(3)微小RNA 146a(micro RNA 146a,miR-146a)抑制剂(miR-146a inhibitor)及靶向CXCR4 siRNA分别下调K562细胞中miR-146a及CXCR4的表达后,在阿霉素(adriamycin,ADM)的干预下K562细胞的活性;(4)大黄素甲醚联合ADM对K562/ADM细胞活性的影响。3.细胞克隆形成实验:检测大黄素甲醚联合ADM对K562/ADM细胞活性的影响。4.流式细胞术及Hoechst 33258检测细胞凋亡:检测(1)miR-146a inhibitor干预K562细胞后,检测K562细胞组、K562+NC组及K562+miR-146a inhibitor组中细胞的凋亡情况;(2)miR-146a mimic干预K562/ADM细胞后,检测K562/ADM细胞组、K562/ADM+NC细胞组及K562/ADM+miR-146a mimic细胞组中细胞的凋亡情况;(3)miR-146a及趋化因子受体-4(chemokine receptor-4,CXCR4)对K562细胞凋亡的影响;(4)大黄素甲醚联合ADM对K562/ADM细胞凋亡的影响;(5)降低K562/ADM细胞中miR-146a的表达后大黄素甲醚对阿霉素诱导的细胞凋亡的影响。5.实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR):检测(1)K562细胞与K562/ADM细胞miR-146a的表达;(2)转染mi R-146a抑制剂下调K562细胞中的miR-146a的表达后各组K562细胞中miR-146a的表达情况;(3)K562/ADM细胞转染miR-146a mimic过表达miR-146a后,各组K562/ADM细胞中miR-146a的表达情况;(4)下调K562细胞中的miR-146a表达后,各组K562细胞中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)、多药耐药蛋白-1(multidrug resistant related protein,MRP-1)、CXCR4的表达情况;(5)上调K562/ADM细胞中的miR-146a的表达后,各组K562/ADM细胞中P-gP、MRP-1、CXCR4的表达情况;(6)大黄素甲醚干预下K562/ADM细胞中mi R-146a的表达情况;(7)K562细胞中转染CXCR4靶向siRNA、miR-146a抑制剂及转染CXCR4靶向siRNA+miR-146a抑制剂后,各组细胞中CXCR4的表达情况;(8)不同浓度的大黄素甲醚对K562/ADM细胞中CXCR4表达的影响。6.蛋白免疫印迹:检测(1)下调K562细胞中的mi R-146a表达后,各组K562细胞中CXCR4的蛋白表达情况;(2)上调K562/ADM细胞中的miR-146a的表达后,各组K562/ADM细胞中CXCR4的蛋白表达情况;(3)不同浓度的大黄素甲醚干预K562/ADM细胞后,各组细胞中CXCR4的蛋白表达情况;(4)K562细胞中转染CXCR4靶向siRNA、miR-146a抑制剂及转染CXCR4靶向siRNA+miR-146a抑制剂后,各组细胞中CXCR4蛋白的表达情况。7.迁移实验:评估K562/ADM细胞中大黄素甲醚对CXCR12结合到CXCR4的影响。8.细胞表面的CXCR4:检测(1)下调K562细胞中的mi R-146a表达后,各组K562细胞表面CXCR4的表达情况;(2)上调K562/ADM细胞中的miR-146a的表达后,各组K562/ADM细胞表面CXCR4的表达情况。结果:1、miRNA-146a在K562/ADM细胞中的表达降低K562细胞和K562/ADM细胞经ADM干预48小时后的IC50分别为0.15μM和3.5μM,表明K562/ADM的耐药倍数是K562细胞的23倍;与K562细胞相比,K562/ADM中mi R-146a的表达明显较低。2、下调miR-146a能增强K562细胞对ADM的耐药性转染miR-146a抑制剂后mi R-146a的表达水平明显降低;下调miR-146a后的K562细胞的生存率明显高于正常的K562细胞及阴性对照组(IC50分别为2.8μM,0.15μM,和0.18μM。下调miR-146a能明显增强K562细胞抵抗ADM诱导的凋亡。3、上调miR-146a能使K562/ADM细胞对ADM的促凋亡更敏感转染mi R-146a mimic的K562/ADM细胞中的miR-146a表达明显增高,与K562/ADM细胞及转染空白质粒的K562/ADM细胞相比能明显增强K562/ADM细胞对ADM的敏感性(IC50分别为0.42μM,3.5μM及3.2μM),表明,上调mi RNA-146a能使K562/ADM细胞对ADM诱导凋亡的作用更敏感。4、miRNA-146a主要针对CXCR4参与K562细胞对ADM耐药性下调K562细胞中的mi R-146a或者上调K562/ADM中的mi R-146a未能引起P-gp及MRP-1的mRNA明显改变,而且miR-146a的表达与CXCR4 mRNA的表达呈负相关CXCR4是miR-146 a的直接目标。靶向CXCR4 siRNA能抑制细胞中CXCR4的表达;miR-146a抑制剂能诱导CXCR4表达的上调并且能明显地增强K562细胞的耐药性。5、大黄素甲醚能增强K562/ADM细胞对ADM的敏感性大黄素甲醚对K562/ADM细胞活性的影响呈剂量依赖性;耐药逆转倍数在2μM和5μM的浓度下分别为2.03倍和5.3倍。与单独用ADM干预的细胞相比,当大黄素甲醚和ADM联合作用于K562/ADM时,细胞集落数及集落大小明显减少。与单独用ADM干预相比,联合干预浓度在2μM和5μM大黄素甲醚作用于细胞后能显着增加K562/ADM细胞的凋亡。6、大黄素甲醚通过上调miR-146a和干预CXCL12/CXCR4信号通路逆转耐药大黄素甲醚干预细胞后能导致K562/ADM细胞中miR-146 a水平呈剂量依赖性增加。大黄素甲醚增强K562/ADM细胞对ADM敏感性的作用经miR-146a抑制剂干预后几乎完全消失。大黄素甲醚干预后导致K562/ADM细胞中趋化因子受体CXCR4的表达呈剂量依赖性降低,经大黄素甲醚干预后迁移明显受损。结论:1.下调miR-146和上调CXCR4可能与K562/ADM细胞的耐药性有关。2.大黄素甲醚可以通过诱导miR-146 a的表达抑制CXCL12/CXCR4信号从而逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-05-01）
杨璇,高菲,刘文君[10]（2018）在《大黄素甲醚对白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的影响及机制研究》一文中研究指出目的评价大黄素甲醚对慢性粒细胞白血病(CML)耐药细胞系K562/ADM多药耐药的逆转作用及其机制。方法 CCK-8、克隆形成实验检测细胞的增殖变化,流式细胞仪、Hoechst染色检测细胞的凋亡,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测各相关基因的表达,迁移实验检测细胞的侵袭能力。结果大黄素甲醚能增强K562/ADM细胞对ADM的敏感性,耐药逆转倍数在2和5μmol/L的浓度下分别为2.03和5.30倍。miRNA-146a在K562耐药细胞系中低于K562细胞,而其在K562/ADM细胞中过表达能恢复细胞对ADM的敏感性。大黄素甲醚可以通过诱导miRNA-146a的表达抑制CXCL12/CXCR4信号通路从而能增强ADM抗肿瘤细胞增殖的作用。结论大黄素甲醚可以通过上调miRNA-146a的表达抑制CXCL12/CXCR4信号从而逆转K562/ADM细胞对ADM的耐药性。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2018年12期）
耐药细胞系论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨SALL4基因与急性髓细胞白血病耐药的相关性。方法通过RNA干扰技术将表达SALL4干扰序列的质粒载体转染至急性髓细胞白血病细胞系KG1A中,建立抑制SALL4基因的表达体系。在此条件下,通过MTS细胞增殖检测法检测SALL4基因抑制前后对阿霉素和柔红霉素的耐药情况。结果实时荧光定量PCR结果显示,SALL4的干扰效率良好。在此干扰体系下,不同浓度化疗药物阿霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)作用时,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(62.80±1.64)%、(26.80±2.68)%、(18.00±2.00)%]显着低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(85.40±4.03)%、(56.80±5.06)%、(26.50±4.50)%],差异有统计学意义(t=-22.6、-30.4、-8.6,均P<0.05)。不同浓度化疗药物柔红霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)的作用下,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(42.00±1.87)%、(28.00±1.22)%、(21.60±2.51)%]也显着低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(61.00±1.87)%、(40.20±2.68)%、(27.00±1.22)%],差异有统计学意义(t=-18.8、-12.2、-5.4,均P<0.05)。结论 SALL4基因的表达是急性髓细胞白血病产生耐药的正性调节因素。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
耐药细胞系论文参考文献
[1].马玉花,邹亚伟,彭盛,卢婕伦,黎波.MSCs分泌的肝细胞生长因子对人髓系白血病细胞系K562及其耐药株K562/G01增殖及药物敏感性的影响[J].基础医学与临床.2019
[2].郭野.SALL4基因表达与急性髓细胞白血病细胞系KG1a耐药相关性研究[J].国际检验医学杂志.2019
[3].苗留飞,杨阳,余柏增,张家勋,李晓军.叁代EGFR-TKI奥希替尼(AZD9291)耐药细胞系建立及耐药标志预测分析[J].现代检验医学杂志.2019
[4].刘家铭,张静雯,司望利.下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响[J].现代肿瘤医学.2019
[5].梁毅舟.青蒿琥酯对人唾液腺腺样囊性癌耐药细胞系SACC-83/DDP抑制及耐药逆转作用的研究[D].广西医科大学.2019
[6].方宗宇.儿童B-ALL微小残留病变检测的关键标志研究及Ph~+B-ALL伊马替尼耐药细胞系的建立[D].贵州医科大学.2019
[7].邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光.人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立[J].现代预防医学.2018
[8].谢简明.依布硒啉阻滞及逆转HIF-1α在A549细胞系中介导的多药耐药的研究[D].江苏大学.2018
[9].杨璇.大黄素甲醚逆转白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的研究[D].西南医科大学.2018
[10].杨璇,高菲,刘文君.大黄素甲醚对白血病耐药细胞系K562/ADM耐药性的影响及机制研究[J].中国现代医学杂志.2018