论文摘要
东亚钳蝎抗癌止痛肽（AGAP）是一种具有镇痛抗肿瘤活性的蝎毒素,其碱基序列长192bp,该序列编码64个氨基酸。由于抗癌药物对正常组织有一定的损伤作用,而靶向药物在治疗和应用中有很大的优势,因此本实验构建了一个东亚钳蝎抗癌止痛肽肺癌靶向融合体。鉴于RGD-4C已经有文献证明其靶向作用并且能够抑制肿瘤的转移,因此采用它为靶向肽以达到抗癌止痛肽的靶向作用。鉴于大肠杆菌和毕赤酵母表达各有优缺点,因此在两者中都进行了表达,以比较其优势劣势,期望得到最优的表达方案。本实验通过PCR的方式把靶向肽的基因序列引入到目的蛋白基因的5’端,并克隆到表达载体pNJU中,融合蛋白得到了可溶性的表达。通过金属螯合层析的方法从表达产物中分离纯化出融合蛋白RGD-4C-His Tag-AGAP。采用小鼠醋酸扭体法测定镇痛活性,腹腔注射给药途径,给药剂量为3.78mg/kg时,重组蛋白RGD-4C-HisTag-AGAP对由醋酸引起的小鼠扭体反应抑制率为27.10%（p<0.01）。本实验还构建了抗癌止痛肽肺靶向融合体的毕赤酵母表达载体pPIC9K-RGD-4C-His Tag-AGAP,通过电转的方式导入到毕赤酵母以后,通过同源重组,永久存在于酵母基因组中,通过甲醇诱导表达,经western blot检测蛋白得到表达。