论文摘要
背景：神经病理性疼痛是由各种原因（外伤、肿瘤和感染等）引起的神经损伤所致,主要表现在损伤愈合后数周甚至数年依然存在疼痛超敏和自发性疼痛等痛觉异常,使得患者痛苦不堪,甚至丧失劳动能力。大鼠腰5脊神经结扎模型(（the spinal nerve ligation model, SNL）是目前最为广泛使用的神经病理性疼痛模型之一,它能较好的再现神经病理性疼痛的临床表现,主要包括自发痛、痛觉过敏和触诱发痛。新型镇痛药齐考诺肽（Ziconotide, ZIC）可产生显著抗神经病理性疼痛的作用；且长时间使用该药物不会产生耐受性和成瘾性,自上市以来已广泛应用于临床上各类顽固性严重疼痛。但由于进口齐考诺肽的成本过高,使得此药在国内临床上的应用受到极大的限制,因此,进行国产齐考诺肽的生产及药效学研究十分必要。另外,齐考诺肽虽效果肯定,但治疗窗窄,为增强其镇痛效应、减少用药量及毒副作用,则要求探索出更好的用药模式。联合用药是临床上较为认可的用药模式之一。研究证实,咪唑达仑具有一定程度的抗病理性疼痛作用,且可显著增强局麻药及其它多种药物的镇痛效应,并有效减少相关毒副作用,因此推测齐考诺肽与咪达唑仑联合鞘内使用将有望取得更为理想的临床治疗效果。本研究拟采用大鼠腰五脊神经结扎后切断模型（the spinal nerve ligation model, SNL）作为神经病理性疼痛模型,通过行为学测试检测大鼠造模及给药前、后机械痛阈（和）热痛阈的变化,从以下几个方面进行研究,以评价国产齐考诺对慢性神经病理性疼痛的临床前疗效；并初步探讨鞘内联合齐考诺肽和咪达唑仑对大鼠慢性神经病理性疼痛模型的疗效。第一部分进口及国产齐考诺肽对大鼠神经病理性疼痛的治疗作用目的观察国产和进口齐考诺肽注射液对大鼠腰五脊神经结扎加切断（L5SNL）引起的神经病理性疼痛的抑制作用,并对两药进行等效性比较。方法180-220g雄性SD大鼠88只,适应性饲养并适应监测环境5d后,于第6及8d（即术前第3d和ld）进行50%机械刺激撤足阂值（50% paw withdrawal threshold,50%PWT）和热刺激撤足潜伏值（thermal withdrawal duration, TWD）共两次基础痛阈的测定。选择50%PWT值>4g的大鼠,于第9d进行大鼠左侧腰5脊神结扎切断+鞘内置管术（假手术组大鼠仅暴露并分离L5脊神经,不损伤神经）。造模后第3d进行鞘内导管利多卡因测试,第4、6d进行造模后50%PWT和TWD的监测,选择鞘内置管位置正确且50%PWT值<4g（假手术组除外）的大鼠于术后第7d给药。随机分为11组,每组8只。假手术组（SC）:0.9%NS 20ul; L5SNL模型组（L5SNL）:0.9%NS 20ul;国产齐考诺肽第一批次低、中、高剂量组（LZ1、MZ1、HZ1）:国产齐考诺肽ZIC1 30、100、300ng/只；国产齐考诺肽第二批次低、中、高剂量组（LZ2、MZ2、HZ2）:国产齐考诺肽ZIC230、100、300ng/只；阳性对照品低、中、高剂量组（LTC、MTC、HTC）:进口齐考诺肽30、100、300ng/只。监测大鼠给药前、给药后1、2、4、8h的50%机械刺激撤足阈值和热刺激撤足潜伏值,计算药物的最大治疗效应（MPE）,评价抗神经病理性疼痛的效果。运用SPSS1310统计软件,所有数据用x±s表示,50%机械阈值采用秩和检验和单因素方差分析方法,热撤足潜伏值采用配对T检验和单因素方差分析的方法。P<0.05认为有统计学意义.。结果（1）与SC组相比,各组大鼠经SNL造模后痛阈显著降低（P<0.01）；（2）与L5SNL组相比,鞘内单次给予30ng,100ng,300ng/只国产或进口齐考诺肽均可显著提高大鼠50%PWT和TWD（P<0.05或P<0.01）,给药后1h达最高值,并在该水平上维持4h以上,各剂量组间呈明显量效关系；（3）与同剂量的阳性对照组比较,两个批次国产齐考诺肽30ng组的50%PWT和MPE提高更为显著（P<0.01）,TWD则相对较低（P<0.05）；其它剂量组的50%PWT和TWD均无统计学差异。结论国产与进口齐考诺肽在大鼠慢性神经病理性疼痛模型中均具有明显的镇痛作用；与进口齐考诺肽相比,国产齐考诺肽具有同样的治疗效应。第二部分鞘内注射咪达唑仑对大鼠神经病理性疼痛的治疗作用目的观察鞘内注射咪达唑仑后对大鼠腰5脊神经结扎加切断引起的神经病理性疼痛的治疗作用。方法180-220g雄性SD大鼠40只,适应性饲养并适应监测环境5d后,于第6及8d（即术前第3d和1d）进行50%机械刺激撤足阈值（50%paw withdrawal threshold,50%PWT）共两次的基础痛阈测定。选择50%PWT值>4g的大鼠,于第9d进行大鼠左侧腰5脊神结扎切断+鞘内置管术。造模后第3d进行鞘内导管利多卡因测试,第4、6d进行造模后50%PWT监测,选择鞘内置管位置正确且50%PWT值<4g（假手术组除外）的大鼠于术后第7d给药。随机分为5组,每组8只。假手术组（SC）:0.9%NS20ul:模型组（MC）:0.9%NS20u；咪达唑仑低、中、高三个剂量组（ML、MM、MH）:分别给予咪达唑仑1、5、25ug/只。行为学测试检测大鼠给药前后50%PWT的变化,计算对应时间点的最大治疗效应百分比（MPE）,评价抗神经病理性疼痛的效果。运用SPSS1310统计软件,采用秩和检验和单因素方差分析方法,所有数据用x±s表示,P<0.05认为有统计学意义.。结果（1）造模前各组大鼠左、右脚的50%PWT均无统计学差异（P>0.5）；造模后与造模前相比,左、右脚50%PWT均明显降低（P<0.01）,与右侧相比,左侧降低更为显著（P<0.01）；造模前后假手术组大鼠的50%PWT无明显变化（P>0.5）, SNL造模后的大鼠与假手术组相比,左、右脚50%PWT均明显降低（P<0.01）。（2）与L5SNL组相比,鞘内给予1、5、25ug咪达唑仑呈剂量依赖性提高大鼠50%PWT和MPE （P<0.05或 P<0.01）,在给药后1h开始起效,4h达最高值,并在该水平维持至8h以上。结论：鞘内单次注射咪达唑仑对大鼠腰5脊神经结扎加切断引起的神经病理性疼痛具有显著的镇痛作用。第三部分鞘内联合注射齐考诺肽和咪达唑仑对大鼠神经病理性疼痛的疗效目的观察齐考诺肽合用咪达唑仑后对大鼠神经病理性疼痛的疗效,初步探讨两药合用的最佳剂量范围,为临床用药提供参考依据。方法180-220g雄性SD大鼠64只,适应性饲养并适应监测环境5d后,于第6及8d（即术前第3d和1d）进行50%机械刺激撤足阈值（50% paw withdrawal threshold,50%PWT）共两次的基础痛阈测定。选择50%PWT值>4g的大鼠,于第9d进行大鼠左侧腰5脊神结扎切断+鞘内置管术。造模后第3d进行鞘内导管利多卡因测试,第4、6d进行造模后50%PWT监测,选择鞘内置管位置正确且50%PWT值<4g（假手术组除外）的大鼠于术后第7d给药。随机分为8组,每组8只。L5SNL模型组（0.9%NS20ul）、齐考诺肽最低有效剂量组（Z组,齐考诺肽30ng）、咪达唑仑组（分M1、M2、M3三个亚组,分别给予咪达唑仑1、5、25ug）、复合组（分Z+M1、Z+M2、Z+M3三个亚组,分别用咪达唑仑1、5、25ug联合齐考诺肽30ng）。行为学测试检测大鼠给药前后50%PWT的变化,计算对应时间点的最大治疗效应百分比（MPE）,评价抗神经病理性疼痛的效果。运用SPSS1310统计软件,采用秩和检验和单因素方差分析方法,所有数据用x±s表示,P<0.05认为有统计学意义.。结果（1）造模前各组大鼠左、右脚的50%PWT均无统计学差异（P>0.5）；造模后与造模前相比,左、右脚50%PWT均明显降低（P<0.01）,与右侧相比,左侧降低更为显著（P<0.01）,平均值分别为：1.20g、6.51g。（2）与L5SNL组相比,鞘内给予1、5、25ug咪达唑仑呈剂量依赖性提高大鼠50%PWT和MPE（P<0.05）,给药后1h开始起效,4h达最高值,维持至8小时后逐渐下降；Z组给药后1h达最高值,并在该水平上维持4h以上后逐渐下降；复合组Z+M1、Z+M2、Z+M3组50%PWT和MPE值显著提高,统计学差异显著（P<0.01）。（3）与M1、M2、M3组相比,复合组Z+M1、Z+M2、Z+M3的50%PWT和MPE提高更为显著（P<0.01）,药物达到峰值的时间提前；与Z组相比,复合组Z+M1、 Z+M2、Z+M3的50%PWT和MPE的统计学差异显著（P<0.01）,维持时间更长。（4）与Z+M1组相比,Z+M2组的50%PWT和MPE提高更为显著（P<0.01）；与Z+M3组相比,Z+M2组的50%PWT和MPE无统计学差异,无嗜睡及神经相关毒副作用。结论：1、齐考诺肽和咪达唑仑鞘内联合应用对大鼠神经病理性疼痛具有显著的治疗效果,且联合应用比单独应用齐考诺肽或咪达唑仑的镇痛效果更好。2、联合用药后镇痛作用起效快,维持时间延长。3、为尽可能减少齐考诺肽的用量和毒副作用,可选择齐考诺肽最低有效浓度联合咪达唑仑鞘内给药,咪达唑仑的最佳复合剂量为5ug/左右（按体重约为0.02-0.1ug/g）,副作用少且治疗效果显著。
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