论文摘要
背景:白血病是造血系统的恶性肿瘤,也是儿童最常见的恶性肿瘤,严重威胁患儿的生命、影响患儿的生存质量。随着人们对白血病发生、发展的不断认识,并通过多种治疗手段和联合化疗,白血病的完全缓解率有了显著提高。但是,髓外白血病的发生是影响持续缓解和导致早期复发的主要原因。临床上最常采取的预防和治疗髓外白血病的方法是加大化疗剂量和延长化疗疗程,这样不仅增加了化疗药物的毒副作用,也增加了患儿的痛苦和经济负担。因此,寻找有效的预防和治疗髓外白血病的药物具有重要的意义和价值。我国传统中药因其独特的药理活性已受到越来越多的关注。有研究表明,川芎嗪和苦参碱能抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、促进肿瘤细胞凋亡、逆转肿瘤细胞多药耐药。我们的前期研究结果已经证实川芎嗪能有效抑制HL-60细胞的浸润转移能力,而其它有关川芎嗪和苦参碱抑制白血病细胞浸润转移能力的研究国内外尚未见报道。目的:以HL-60细胞和Jurkat细胞为研究对象,观察低、中、高浓度川芎嗪和苦参碱对白血病细胞粘附、运动和侵袭以及基质金属蛋白酶表达的影响,初步探讨川芎嗪和苦参碱抑制白血病细胞浸润转移的作用机制。方法:体外培养HL-60细胞和Jurkat细胞,通过MTT法筛选最佳药物浓度,经低、中、高浓度（0.05g/L、0.1g/L、0.15g/L）川芎嗪处理Jurkat细胞,经低、中、高浓度（0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L）苦参碱处理HL-60细胞和Jurkat细胞,通过细胞粘附实验、细胞迁移实验和肿瘤细胞体外侵袭实验,观察低、中、高浓度川芎嗪和苦参碱对白血病细胞粘附能力、运动能力和侵袭能力的影响,并采用RT-PCR检测HL-60细胞和Jurkat细胞MMP-2和/或MMP-9 mRNA的表达。结果:1.低、中、高浓度川芎嗪作用48h,Jurkat细胞存活率分别为（90.1±1.1）%、（82.8±1.8）%、（74.3±2.2）%;低、中、高浓度苦参碱作用48h,HL-60细胞存活率分别为（88.2±0.9）%、（81.6±1.4）%、（74.9±2.1）%;Jurkat细胞存活率分别为（87.4±2.1）%、（81.0±1.2）%、（73.4±1.2）%;2.低、中、高浓度川芎嗪作用1h Jurkat细胞的粘附率分别为（86.8±0.4）%、（79.2±1.9）%、（71.7±2.2）%;作用8h Jurkat细胞的迁移率分别为（87.5±0.5）%、（75.1±0.8）%、（61.9±1.2）%;作用48h Jurkat细胞的侵袭率分别为（81.4±2.2）%、（66.0±3.6）%、（50.0±5.3）%;3.低、中、高浓度苦参碱作用1h HL-60细胞的粘附率分别为（85.8±0.5）%、（73.5±2.0）%、（61.9±1.3）%;作用8h HL-60细胞的迁移率分别为（82.9±1.1）%、（70.9±0.6）%、（60.1±2.5）%;作用48h HL-60细胞的侵袭率分别为（80.2±2.3）%、（63.9±3.2）%、（48.8±2.2）%;4.低、中、高浓度苦参碱作用1h Jurkat细胞的粘附率分别为（88.1±0.6）%、（79.9±1.2）%、（70.0±1.6）%;作用8h Jurkat细胞的迁移率分别为（88.3±1.0）%、（74.7±2.2）%、（61.9±2.2）%;作用48h Jurkat细胞的侵袭率分别为（84.8±1.7）%、（70.4±2.2）%、（53.4±4.1）%;5.低、中、高浓度川芎嗪作用48h,Jurkat细胞MMP-9 mRNA表达率分别为（73.2±4.0）%、（51.3±2.3）%、（46.7±1.6）%;低、中、高浓度苦参碱作用48h,HL-60细胞MMP-2 mRNA表达率分别为（88.2±7.4）%、（87.8±9.2）%、（85.7±8.5）%,HL-60细胞MMP-9 mRNA表达率分别为（78.3±3.4）%、（67.8±6.4）%、（66.3±4.4）%;Jurkat细胞MMP-9 mRNA表达率分别为（82.4±6.5）%、（72.2±8.7）%、（66.1±6.5）%;6. MMP-9在Jurkat细胞中明显表达,MMP-2则表达不明显;MMP-2和MMP-9在HL-60细胞中均明显表达;7. Jurkat细胞的侵袭能力与MMP-9 mRNA的表达呈正相关;HL-60细胞的侵袭能力与MMP-2和MMP-9 mRNA的表达呈正相关。结论:1.川芎嗪和苦参碱均能抑制HL-60细胞和/或Jurkat细胞的增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性;0.05g/L、0.1g/L、0.15g/L川芎嗪和0.1g/L、0.15g/L、0.2g/L苦参碱是本实验的最佳药物浓度;2. 0.05g/L、0.1g/L和0.15g/L川芎嗪可以抑制Jurkat细胞的粘附能力、运动能力和侵袭能力,其抑制作用呈剂量依赖性;3. 0.1g/L、0.15g/L和0.2g/L苦参碱可以抑制HL-60细胞的粘附能力、运动能力和侵袭能力,其抑制作用呈剂量依赖性;4. 0.1g/L、0.15g/L和0.2g/L苦参碱可以抑制Jurkat细胞的粘附能力、运动能力和侵袭能力,其抑制作用呈剂量依赖性;5. 0.05g/L、0.1g/L和0.15g/L川芎嗪可以下调Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达,其作用呈剂量依赖性;0.1g/L、0.15g/L和0.2g/L苦参碱可以下调HL-60细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,可以下调Jurkat细胞MMP-9 mRNA的表达,对MMP-9 mRNA表达的抑制作用呈剂量依赖性;6. Jurkat细胞高表达MMP-9,不表达MMP-2;HL-60细胞高表达MMP-2和MMP-9;7.川芎嗪和苦参碱抑制白血病细胞浸润转移的作用机制与下调MMP-2和/或MMP-9 mRNA的表达有关。
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