牙鲆促性腺激素释放激素及其免疫影响的研究

论文摘要

促性腺激素释放激素（GnRH）是下丘脑-垂体-性腺轴的关键信息分子,在脊椎动物生殖神经内分泌调控中特别是在刺激促性腺激素的合成和释放方面具有至关重要的调节作用,是神经-免疫-内分泌三大调节系统之间互相联系的信使之一,鱼类GnRH及其受体结构和生物学功能逐渐成为神经内分泌和生殖生物学研究的热点之一。牙鲆（Paralichthys olivaceus）,属硬骨鱼纲,鲽形目,鲆科（Bothidae）,是中国重要的海水养殖鱼类,关于牙鲆GnRH及其受体的分子生殖内分泌研究未见报道,了解牙鲆GnRH及其受体的类型、分布和作用,对阐明牙鲆神经-生殖-内分泌的相互调控具有有十分重要的意义。本论文的研究结果如下:（1）本文采用免疫组织化学技术检测了GnRH和NPY在性成熟牙鲆组织内的分布。表明:GnRH阳性细胞分布于脑、垂体、胃、肠、卵巢等神经、消化和生殖器官;NPY在延脑、大脑、卵巢中检测到了阳性反应细胞。（2）采用RACE技术获得牙鲆607 bp全长cGnRH-II cDNA,编码95个氨基酸的前体肽。该cGnRH-II前体肽包含有23个氨基酸残基的信号肽、cGnRH-II成熟十肽（QHWSHGWYPG）、一个3肽（Gly-Lys-Arg）加工位点和49个氨基酸残基的促性腺激素释放激素相关肽（GAP）。前体氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆cGnRH-II前体与条斑星鲽（barfin flounder）相似性最高为97.6%,其次是军曹鱼科、丽鱼科和鲷科鱼类;与哺乳动物、爬行动物和两栖动物同源性较低。RT-PCR检测显示,cGnRH-II基因在牙鲆肾脏、脑、垂体、鳃和卵巢中表达;以肾脏中表达水平最高。（3）克隆获得了牙鲆395 bp全长sbGnRH cDNA,编码98个氨基酸的sbGnRH前体。该sbGnRH前体肽包含有26个氨基酸残基的信号肽、sGnRH成熟十肽（QHWSYGLSPG）、一个三肽（Gly-Lys-Arg）加工位点和59个氨基酸残基组成的GAP。前体氨基酸序列同源性分析表明,牙鲆sbGnRH与条斑星鲽的同源性最高为86.7%。RT-PCR检测显示,sbGnRH基因在牙鲆脑、胃、脾脏、眼、垂体、肌肉、肠、卵巢中皆有表达。（4）利用3′-RACE技术克隆得到了牙鲆391 bp sGnRH cDNA 3′-末端片段序

论文目录

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• 摘 要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 促性腺激素释放激素的研究进展
• 1.1 GnRH 的发现
• 1.2 GnRH 一级结构
• 1.3 GnRH 肽的功能
• 1.4 GnRH 分子的分类与系统进化
• 1.5 GnRH 肽的功能域和构象
• 2 促性腺激素释放激素受体的研究进展
• 2.1 GnRH 受体的系统进化
• 2.2 GnRH 受体的结构特征
• 2.3 GnRH 受体的三级结构
• 2.4 type I GnRH 受体中GnRH 结合位点
• 3 促性腺激素释放激素的激活机制
• 87/Asp³¹⁸ 的相互作用'>3.1 TM II/VII 中 Asn⁸⁷/Asp³¹⁸的相互作用
• 138/Arg¹³⁹ 在TM III 中的相互作用'>3.2 Asp¹³⁸/Arg¹³⁹ 在TM III 中的相互作用
• 2.53（90）-Lys^{3.32（121）}-Asp^2.61（98）的三联体'>3.3 Glu^2.53（90）-Lys^{3.32（121）}-Asp^2.61（98）的三联体
• 3.4 ECL II 的作用
• 4 GnRH 受体活化及其介导的信号传导
• 4.1 GnRH 受体活化的完整模式
• 4.2 肽-受体介导的信号传导和细胞内信号传导的新概念
• 第二章 牙鲆促性腺激素释放激素的免疫组织化学研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 结论与讨论
• 第三章 牙鲆促性腺激素释放激素基因的克隆与表达特征分析
• 第一节 牙鲆脑促性腺激素释放激素cGnRH-II 基因克隆和特征分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 第二节 牙鲆促性腺激素释放激素sbGnRH 基因的分子克隆与特征分析
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 第三节 牙鲆促性腺激素释放激素sGnRH 基因片段的克隆与系统进化分析-
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 第四节 本章结论和讨论
• 第四章 牙鲆促性腺激素释放激素受体（GnRH-R）基因的克隆与组织表达分析
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 2.1 牙鲆GnRH 受体全长cDNA 的克隆
• 2.2 牙鲆GnRH 受体cDNA 的获得和结构特征分析
• 2.3 牙鲆GnRH 受体蛋白功能域和活性位点查找
• 2.4 牙鲆GnRH-R 多序列比对与系统进化分析
• 2.5 GnRH 受体在牙鲆中的组织分布
• 3 结论与讨论
• 3.1 牙鲆GnRH 受体属于type I GnRH-R
• 3.2 牙鲆GnRH 受体保守的结构特征
• 3.3 牙鲆GnRH 受体可能参与到信号传导的分子特征
• 3.4 GnRH 受体与GnRH 共表达的意义
• 第五章 GnRH 类似物对牙鲆脑垂体 GnRH-R、GtH 和 GH 转录水平的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 3 结论与讨论
• 第六章 GnRH 类似物对牙鲆 IL-2 分泌及非特异性免疫功能的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 3 结论与讨论
• 参考文献
• 博士在读期间发表的文章
• 致谢