利用药物敏感型酵母筛选具有抗朊病毒活性的中药提取物

论文摘要

哺乳动物的一系列致死性的传染性海绵样脑病都是由朊病毒引起的。遗憾的是,迄今为止,对朊病毒疾病的治疗仍然没有有效的治疗药物和治疗方法;寻找有效的治疗朊病毒疾病的药物与治疗方法一直是国内外生物学和医学领域的研究热点。基于酵母的抗朊病毒药物筛选模型是近年来建立的一种被证明有效、安全、快速的抗朊病毒候选药物筛选模型,目前的基于酵母的抗朊病毒药物筛选模型主要利用野生型酵母朊病毒的表型变化筛选抗朊病毒候选药物,由于野生型酵母对药物的敏感性较差,因而易造成某些温和型药物的漏筛。本研究旨在利用药物敏感型酵母朊病毒细胞模型筛选具有抗朊病毒活性的中药提取物。首先,通过比较NGMC、SSA1-21、SSBΔ、ERG6Δ和野生型酵母朊病毒在表型、生长特性和对抗朊病毒药物的敏感性差异,确定了利用ERG6Δ酵母朊病毒来筛选具有抗朊病毒活性的中药提取物。其次,利用ERG6Δ药物敏感型酵母朊病毒通过液体治愈法对31种中药提取物进行了初步筛选,研究发现两面针、烟草、五味子和白术四种中药提取物具有不同程度的抗酵母朊病毒活性。最后,利用表型分析方法和蛋白水平的半变性琼脂糖凝胶电泳技术结合免疫印记方法定量分析了两面针提取物的抗朊病毒效果,研究结果表明:两面针提取物含量为15 mg/ml时,作用ERG6Δ酵母朊病毒五天后的初步治愈率达到了92.6%,更进一步的表型方法分析和蛋白水平的检测结果证实两面针提取物对ERG6Δ酵母朊病毒具有明显的治愈作用。综合以上实验结果,本研究初步得出结论:ERG6Δ药物敏感型酵母朊病毒适合于规模化筛选抗朊病毒中药提取物;两面针、烟草、五味子和白术等中药提取物具有不同程度的抗酵母朊病毒活性;定量分析两面针提取物的抗朊病毒作用发现两面针提取物含量为15 mg/ml时,作用ERG6Δ酵母朊病毒五天后的初步治愈率达到了92.6%,而且蛋白水平的检测结果证实了两面针提取物对ERG6Δ酵母朊病毒的治愈作用。本研究为中药的抗朊病毒作用积累了实验数据,并为抗朊病毒候选药物的筛选提供了新的方向。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 引言
• 0.1 朊病毒
• 0.1.1 朊病毒概述
• 0.1.2 朊病毒相关疾病及危害
• 0.1.3 朊病毒疾病治疗候选药物
• 0.2 酵母朊病毒
• 0.2.1 酵母朊病毒概述
• +]'>0.2.2 酵母朊病毒[PSI⁺]
• 0.3 目的和意义
• 第1章 四种药物敏感型酵母朊病毒菌株的基本性能
• 1.1 实验目的
• 1.2 实验材料与试剂
• 1.2.1 实验菌株
• 1.2.2 试剂
• 1.2.3 主要仪器设备
• 1.3 实验方法
• 1.3.1 培养基与化学试剂的配制
• 1.3.2 四种酵母朊病毒基本性能测定
• 1.4 实验结果与讨论
• 1.4.1 酵母朊病毒的表型差异
• 1.4.2 四种酵母朊病毒菌株的生长特性比较
• 1.4.3 四种酵母朊病毒菌株对盐酸胍和菲啶的敏感性对比结果
• 1.5 小结
• 第2章 利用 ERG6Δ酵母朊病毒细胞初筛具有抗朊病毒活性的中药粗提物
• 2.1 实验目的
• 2.2 实验材料与试剂
• 2.2.1 实验菌株
• 2.2.2 试剂
• 2.2.3 主要仪器设备
• 2.2.4 实验材料
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 培养基与化学试剂的配制
• 2.3.2 含中药提取液培养基的制备
• 2.3.3 治愈酵母朊病毒的中药液浓度的确定
• 2.3.4 中药液液体治愈酵母朊病毒
• 2.4 实验结果与讨论
• 2.4.1 中药提取液抑制酵母生长的浓度
• 2.4.2 中药提取物的抗酵母朊病毒活性
• 2.5 小1结
• 第3章 定量分析两面针提取物的抗酵母朊病毒效果
• 3.1 实验目的
• 3.2 实验材料与试剂
• 3.2.1 实验菌株
• 3.2.2 试剂
• 3.2.3 主要仪器设备
• 3.2.4 实验材料
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 培养基与化学试剂的配制
• 3.3.2 两面针提取物的制备
• 3.3.3 两面针提取物抑制酵母的最小抑菌浓度测定
• 3.3.4 两面针提取物液体治愈酵母朊病毒
• 3.3.5 利用表型特性检验两面针提取物治愈酵母朊病毒的假阳性结果
• 3.3.6 两面针提取物治愈酵母朊病毒的假阴性结果检查
• 3.3.7 两面针提取物作用酵母朊病毒后不同表型菌落的传代稳定性?
• 3.3.8 利用SDD-AGE/Western blot 检测两面针提取物的作用效果
• 3.4 实验结果与讨论
• 3.4.1 两面针提取物抑制酵母的最小抑菌浓度
• 3.4.2 两面针水提物具有明显地抗酵母朊病毒效果
• 3.4.3 两面针水提物作用酵母朊病毒后假阳性、假阴性结果分析
• 3.4.4 两面针水提物作用酵母朊病毒后菌落表型的传代稳定性
• 3.4.5 蛋白水平检测两面针提取物的作用效果
• 3.5 小结
• 第4章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况