产脂肪酶木霉的分离筛选鉴定及酶学性质研究

论文摘要

从北京、河北任丘、保定、张家口、新疆、云南、蒙古等地采集了23份土壤样品分离出木霉菌株114株,筛选到4株产脂肪酶的木霉菌株,编号为:153-1、13-2、30425、西1-1,根据菌株的菌落形态、显微镜观察和ITSrDNA序列测定,鉴定该4菌株分别为哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、长枝木霉（T. longibrachiatum）、哈茨木霉（T.harzianum）、长枝木霉（T. longibrachiatum）,其酶活分别为4.79 U/ml、2.41 U/ml、5.32 U/ml、3.30 U/ml。研究了脂肪酶的酶学性质,菌株153-1产生的脂肪酶最适反应温度为45℃,最适反应pH为9.5,金属离子Ca2+、Mg2+、Cu2+、Pb2+等对其活力有抑制作用,而Fe2+、Ba2+、Li2+对其有激活作用;菌株13-2产生的脂肪酶最适反应温度为40℃,最适反应pH为10.0,金属离子Mn2+、Cu2+等对其活力有抑制作用,而K+、Fe2+、Ba2+对其有激活作用;菌株30425产生的脂肪酶最适反应温度为20℃,最适反应pH为7.5,金属离子Li2+、Mn2+、Cu2+等对其活力有抑制作用,而K+、Ca2+、Mg2+对其有激活作用;菌株西1-1产生的脂肪酶最适反应温度为20℃,最适反应pH为9.5,金属离子Ca2+、Cu2+、Pb2+等对其活力有抑制作用,而K+、Ba2+对其有激活作用。对4个菌株所产脂肪酶进行了分离纯化。菌株发酵液经离心浓缩、硫酸铵沉淀、HiPrep DEAE Fast Flow离子交换层析或Resource Q离子交换层析、Superose12凝胶过滤层析等步骤处理,153-1得到组分单一的脂肪酶,13-2得到两个组分的脂肪酶,30425和西1-1未得到有活性的组分,需试验进一步分析。本试验得到2株产低温脂肪酶的木霉,30425和西1-1;3株产碱性脂肪酶的木霉,153-1、13-2和西1-1;其中西1-1产生的脂肪酶是低温碱性脂肪酶,具有良好的开发前景。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 脂肪酶的来源
• 1.1.1 植物脂肪酶
• 1.1.2 动物脂肪酶
• 1.1.3 微生物脂肪酶
• 1.2 脂肪酶的研究现状
• 1.2.1 脂肪酶的作用机理
• 1.2.2 脂肪酶的底物特异性
• 1.2.3 微生物产生的脂肪酶的性质
• 1.2.4 微生物脂肪酶活力的测定
• 1.2.5 脂肪酶的分离纯化
• 1.2.6 脂肪酶分子生物学方面的研究进展
• 1.3 脂肪酶的应用
• 1.3.1 脂肪酶在制革中的应用
• 1.3.2 脂肪酶在食品及饲料工业中的应用
• 1.3.3 脂肪酶在洗涤剂工业中的应用
• 1.3.4 脂肪酶在造纸工业中的应用
• 1.3.5 脂肪酶在医药和化妆品上的应用
• 1.3.6 脂肪酸的生产
• 1.3.7 聚酯合成
• 1.3.8 合成手性化合物
• 1.3.9 油脂改性
• 1.3.10 环境污染治理
• 1.4 木霉
• 1.4.1 木霉的分类地位与特点
• 1.4.2 木霉的生物学作用
• 1.5 本课题的主要研究内容与意义
• 1.5.1 研究内容与创新点
• 1.5.2 技术路线
• 1.5.3 课题的目的与意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 土样的采集与菌株来源
• 2.1.2 试剂及配制
• 2.1.3 培养基
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 产脂肪酶木霉菌株的分离筛选
• 2.2.2 菌株的鉴定
• 2.2.3 脂肪酶活性测定及酶学性质研究
• 2.2.4 脂肪酶的分离、纯化
• 3 结果与分析
• 3.1 脂肪酶产生菌的筛选
• 3.1.1 菌株的分离
• 3.1.2 平板初筛
• 3.1.3 发酵液复筛
• 3.2 菌株的鉴定
• 3.2.1 菌株的形态学鉴定
• 3.2.2 菌株的全细胞DNA 提取与ITS 序列分析
• 3.3 木霉产生脂肪酶的酶活与酶学性质研究
• 3.3.1 脂肪酶活力与蛋白浓度的研究
• 3.3.2 脂肪酶的酶学性质
• 3.4 脂肪酶的分离纯化
• 3.4.1 离子交换层析
• 3.4.2 凝胶过滤层析
• 4 讨论
• 4.1 产脂肪酶木霉筛选培养基的选择
• 4.2 脂肪酶酶活测定方法的选择
• 4.3 脂肪酶的纯化
• 5 结论
• 5.1 产脂肪酶菌株的分离、筛选与鉴定
• 5.2 脂肪酶的酶学性质研究和酶的分离纯化
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文