论文摘要
目的:乌司他丁（Ulinastain,UTI）是从人尿中提取出来的一种蛋白酶抑制剂,具有抑制白细胞聚集,抑制白细胞释放蛋白酶、稳定溶酶体膜、抑制过量超氧化物的生成和清除产生的超氧化物、清除氧自由基、抑制炎症介质释放等特殊的药理作用。脂多糖（lipopolysacharide,LPS）是革兰氏阴性杆菌内毒素的主要成分,常被用来制备动物的急性肺损伤的模型。本试验通过腹腔内注射LPS建立新生大鼠急性肺损伤模型,同时通过腹腔内注射乌司他丁进行干预,测定肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis facter-α,TNF-α）、白介素-8（ interleukin-8,IL-8 ）、基质金属蛋白酶-9 （ matrix metalloproteinase,MMP-9 ）、髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物岐化酶（superoxidase,SOD）,比较乌司他丁对上述指标的影响,探寻乌司他丁对新生大鼠急性肺损伤的保护作用及机制,为临床研究新生儿急性肺损伤后的治疗提供理论依据方法:新生大鼠ALI模型制备:健康7日龄新生SD大鼠共30只,体重在15g-20g之间,体重间比较无差异,雌雄不拘,随机分组,分对照组、致伤组、干预组。LPS 3mg/Kg腹腔内注射,干预组同时给予腹腔内注射乌司他丁10万U/Kg进行干预。四小时后腹腔内麻醉处死新生大鼠。观察新生大鼠的肺脏的病理变化,测定肺组织湿重/干重比值（wetweight/dry weight,W/D）,测定肺组织中MDA的含量及MPO、SOD的活力,用放射免疫法测定肺组织匀浆中TNF-α、IL-8含量,用免疫组化法检测MMP-9在肺组织的表达。结果1肺组织大体所见:大体观察对照组肺脏呈粉红色,无充血、水肿及梗死灶。致伤组肺呈暗红色,肺体积增大,明显充血、水肿,可见点片状出血,干预组充血、水肿较致伤组轻,可见点状出血。光镜检查:致伤组肺泡腔明显变窄,肺泡和肺间质水肿,肺间质和肺泡腔内有较多量的出血,肺泡壁明显增厚,肺泡壁毛细血管内有淤血,间质内有大量炎性细胞浸润。UTI干预组上述病理变化较致伤组较轻2肺损伤组织病理评分:对照组肺损伤组织病理评分为0分,致伤组肺损伤组织病理评分为2.5±0.3,UTI干预组肺损伤组织病理评分为2.2±0.2,与对照组相比致伤组肺损伤组织病理评分明显升高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺损伤组织病理评分显著降低（P<0.05）3肺组织W/D:对照组肺W/D为4.95±0.44,致伤组肺W/D为5.62±0.57 , UTI干预组肺W/D为5.40±0.39,与对照组相比致伤组肺W/D明显增高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织W/D明显降低（P<0.05）4肺组织MDA:对照组肺组织MDA为8.20±0.92 nmol/mg prot,致伤组肺组织MDA为11.14±1.62 nmol/mg prot ,UTI干预组肺组织MDA为9.50±1.51nmol/mg prot,与对照组相比致伤组肺组织MDA明显增高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织MDA明显降低（P<0.05）5肺组织中SOD :对照组SOD的活力为91.93±4.36NU/mg prot,致伤组SOD的活力为52.50±3.31NU/mg prot, UTI干预组SOD的活力为59.54±2.27 NU/mg prot,与对照组相比致伤组肺组织SOD的活力明显降低（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织SOD的活力显著升高（P<0.05）。6肺组织中TNF-α水平:对照组肺组织中TNF-α为57.07±8.94pg/ml ,致伤组肺组织中TNF-α为220.90±15.15pg/ml , UTI干预组肺组织中TNF-α为199.96±20.85pg/ml,与对照组相比致伤组肺组织中TNF-α水平明显升高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织中TNF-α水平显著降低（P<0.05）7肺组织中IL-8水平变化:对照组肺组织中IL-8为0.43±0.17pg/ml,致伤组肺组织中IL-8为1.32±0.22pg/ml,UTI干预组肺组织中IL-8为1.06±0.19pg/ml,与对照组相比致伤组肺组织中IL-8水平明显升高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织中IL-8水平显著降低（P<0.05）。8肺组织MPO:对照组肺组织MPO为0.97±0.46u/g,致伤组肺组织MPO9.72±3.81u/g, UTI干预组肺组织MPO6.39±2.73u/g,与对照组相比致伤组肺组织MPO明显增高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组肺组织MPO明显降低（P<0.05）9肺组织MMP-9表达强度用IOD表示:对照组大鼠肺组织MMP-9表达强度为3.71×10-4±0.90×10-4 ,致伤组5.83×10-4±1.28×10-4,UTI干预组大鼠肺组织MMP-9表达强度4.78×10-4±1.05×10-4,与对照组相比致伤组新生大鼠肺组织MMP-9表达强度明显升高（P<0.05）,与致伤组相比UTI干预组大鼠肺组织MMP-9表达强度显著降低（P<0.05）。结论:广谱蛋白酶抑制剂-乌司他丁对ALI进行干预,可以抑制机体炎性细胞因子TNF-a、IL-8的产生,保持SOD的活力,降低MDA的水平,减少氧自由基的生成,降低白细胞释放MMP-9、MPO减轻了白细胞对肺组织的损伤,从而产生了对ALI时肺组织的保护作用。