检测传染性支气管炎病毒抗体的血凝抑制试验抗原及IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制

论文摘要

传染性支气管炎（IB）是由传染性支气管炎病毒（IBV）引起的急性、高度接触性传染病,给世界范围内养鸡业带来巨大经济损失。本研究制备了血凝抑制（HI）试验抗原,建立了检测IBV抗体的HI试验方法；对分离的IBV流行毒株（LH株）进行了全面鉴定,并研制了IB-新城疫（ND）-传染性法氏囊病（IBD）-减蛋综合症（EDS）-禽流感（AI）五联灭活疫苗。1检测IBV抗体的HI试验抗原制备本研究比较了三种浓缩IBV方法（超速离心法、PEG沉淀法和PEG透析法）和三种酶（A型产气荚膜梭菌培养滤液、Ⅰ型卵磷脂酶C和神经氨酸酶）对制备HI试验抗原的影响。最后确定最佳方法为：将IBV（M41株）接种于10日龄SPF鸡胚,37℃孵化36h,收获尿囊液经4000g离心30min,将上清再次以25000g离心70min。浓缩的病毒液加入终浓度为3U/mL的PLC1,37℃孵育2h,制备的HI试验抗原具有较高的特异性,建立的HI试验方法可以用于检测IBV HI抗体。2IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制本研究对IBV（LH株）种毒进行了鉴定,将毒株在鸡胚中连续传10代,测得P1、P5和P10代的病毒含量都≥106.5EID50/0.1mL,说明此毒株稳定。IBV（LH株）种毒无细菌、霉菌、支原体和其他外源病毒污染。使用H120弱毒疫苗做基础免疫,3周后再用本毒株所制灭活疫苗免疫,二免IBV HI抗体效价几何平均值是首免HI抗体效价几何平均值的3倍以上,IBV（LH株）具有良好的免疫原性。用NDV（LaSota株）,IBV（LH株）,IBDV（NF8株）,EDSV（AV127株）和H9亚型AIV（F株）接种SPF鸡胚或非免疫鸭胚,收获病毒液,经0.1%甲醛灭活后制得抗原,按照一定生产工艺方法乳化,制成IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗。用五联灭活疫苗免疫鸡只,免疫3周后NDV HI抗体效价几何平均值达到6.5log2,IBV HI抗体效价几何平均值达到7.1log2,IBDV抗体效价几何平均值达到583（大于等于391为阳性）。免疫4周后,免疫鸡只的H9亚型AIV HI抗体效价几何平均值达到7.510g2,EDSV HI抗体几何平均值可以达到8.8log2。攻毒后,免疫鸡可以抵抗IBV（LH株）、ND（F48E8株）和H9亚型AIV（F株）攻击,获得完全保护。五联灭活疫苗对IB、ND、IBD、EDS和H9亚型AI的免疫保护期至少12周。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 符号说明
• 文献综述
• 第一章 检验传染性支气管炎病毒血凝抑制抗体方法的建立
• 1 材料
• 1.1 菌种和毒种
• 1.2 鸡胚、阳性血清和抗原
• 1.3 试剂
• 1.4 仪器及耗材
• 2 IBV HI试验抗原的制备
• 2.1 IBV的浓缩
• 2.2 A型产气荚膜梭菌上清的制备
• 2.3 不同酶处理IBV后HA效价的比较
• 2.4 IBV HA和HI试验标准操作步骤
• 2.5 IBV HI试验抗原的特异性检测
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二章 IB-ND-IBD-EDS-AI五联灭活疫苗的研制
• 1 材料
• 1.1 疫苗和毒株
• 1.2 检测抗原和试剂盒
• 1.3 鸡胚和鸡
• 1.4 培养基和普通化学试剂
• 1.5 仪器
• 2 方法
• 2.1 IBV（LH株）种毒的鉴定
• 2.2 五联灭活疫苗的制备
• 2.3 五联灭活疫苗的质量检验
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 致谢