解毒复肾逐瘀方对肾纤维化作用研究

论文摘要

目的：肾间质纤维化（RIF）是各种慢性肾病进展至终末期肾病的共同途径，积极防治肾纤维化对慢性肾病的防治具有重要意义。肾小管上皮细胞在肾间质纤维化过程发挥重要作用。小管间质病变是决定慢性肾功能不全进程的主要因素，其发生发展机制复杂。解毒复肾逐淤方是福建省立医院中医科在长期临床实践中总结的一个治疗慢性肾病的有效方剂，并取得了良好效果。本研究的目的在于探讨该方对肾间质纤维化的作用及可能机制，为临床方剂的应用提供实验室依据，为临床肾间质纤维化治疗提供新的思路和依据。方法：构建转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞纤维化模型，运用MTT、WesternBlot和流式细胞检测等方法，观察解毒复肾逐淤方对细胞增殖、细胞外基质的变化及结缔组织生长因子表达的影响，从细胞水平揭示该方剂的作用及可能的机制。运用大鼠单侧输尿管结扎模型（UUO）在整体动物水平上观察药物的作用并对细胞实验得出的药物可能的作用机制进行验证。结果：细胞水平实验结果显示，以TGF-β1为直接刺激因子，与HK-2细胞共同培养3d后，可见部分细胞发生形态学改变，变得肥大、拉长成梭形似肌成纤维细胞形态，且大量的HK-2细胞表达α-SMA，Ⅲ型胶原分泌增加，CTGF表达也显著增加。解毒复肾逐淤方可明显抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞形态学变化，多数细胞维持了正常的上皮细胞形态，α-SMA阳性细胞数也减少，且呈现一定的剂量依赖性。各剂量的药物干预组Ⅲ型胶原含量均低于TGF-β1诱导组，且具有剂量依赖效应。同时，干预组药物可明显降低TGF-β1诱导的CTGF表达，推测抑制CTGF表达可能是其阻断TGF-β1诱导的转分化的作用靶点。动物实验结果表明，解毒复肾逐淤方能显著降低UUO模型大鼠的肾间质纤维化水平。病理组织学及免疫组化检测表明这一对肾纤维化的抑制作用与该方剂调控MMP-2、MMP-9及TIMP之间的平衡，并能抑制CTGF的表达有关。结论:解毒复肾逐淤方能减轻肾间质纤维化的损伤，可能与调控TGF-β-CTGF信号通路有关。动物实验结果进一步验证了药物的抗肾纤维化的功效，同时也提示药物的作用与调节肾组织MMP/TIMP的平衡有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 解毒复肾逐淤方对人肾小管上皮细胞纤维化的作用
• 1. 解毒复肾逐淤方对 TGFβ1 诱导下 HK-2 细胞生长的影响
• 2. 解毒复肾逐淤方对 TGFβ1 诱导下 HK-2 细胞迁移能力的影响
• 3. 解毒复肾逐淤方对 TGF 诱导下 HK-2 细胞胶原表达的影响
• 4. 解毒复肾逐淤方对 TGF-β1 诱导的 HK-2 细胞 CTGF、FN 表达的影响
• 5. 讨论
• 第二部分 解毒复肾逐淤方抗肾纤维化作用的体内研究
• 1. 解毒复肾逐淤方对 UUO 大鼠肾纤维化的影响
• 2. 解毒复肾逐淤汤对 UUO 大鼠肾纤维化干预机制研究
• 3. 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢