一种研究血液中肺癌相关游离蛋白的新策略

论文题目: 一种研究血液中肺癌相关游离蛋白的新策略

论文类型: 博士论文

论文专业: 肿瘤学

作者: 肖汀

导师: 程书钧,高燕宁

关键词: 血浆蛋白质组,肿瘤标志物,早期诊断,质谱技术

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 尽管近几年来肺癌的影像诊断和治疗方法都有很大的提高，但肺癌的五年生存率仍然维持在很低的水平，约14％，成为严重威胁人类生存健康的主要杀手。因此，肺癌的早期诊断是保证成功临床治疗和提高生存率的第一步。人类血浆是目前成分最为复杂的标本，含有大量的高丰度的白蛋白以及其它各种异源蛋白，蕴涵着丰富的生物信息。在本项研究中，我们建立了一个新的策略来检测肿瘤细胞释放到血液中的游离蛋白，以此来构建肺癌相关的血液蛋白质谱。经过短暂的体外培养(原代细胞培养或器官培养)肺癌和正常支气管上皮细胞或组织块，我们分析了被释放到无血清条件培养基中的蛋白。通过这套系统，肿瘤组织的微环境可以较为准确的反映出来。条件培养基中的蛋白组分经过1-D聚丙烯酰氨凝胶电泳分离，再利用液相色谱串连质谱(nano-ESI-MS／MS)进行分析鉴定。随后，我们选取13个以上述方法鉴定出来的条件培养基蛋白，通过ELISA和免疫组织化学的方法在蛋白质水平进行体内验证。目前在原代细胞培养和器官培养的条件培养基中一共鉴定出299个蛋白质，其中大多数蛋白没有人体的血液中检测的相关报道。这些条件培养基蛋白通过基因功能分类发现，它们主要参与了细胞生长与维持、蛋白代谢、催化、器官发育、信号传导以及细胞黏附等等重要细胞功能过程。ELISA验证的结果显示，晚期(Ⅲ-Ⅳ期)肺癌病人血浆中MMP1的蛋白水平显著高于早期(Ⅰ-Ⅱ期)病人和正常人的血浆蛋白水平(P＜0.05)。另外，我们也比较了肺癌病人、具有肺部疾患的非肿瘤病人以及正常人血浆中CD98，fascin，ezrin，annexin A4，LAMC2，PIGR／SC，14-3-3 sigma，14-3-3 beta，14-3-3 eta蛋白水平的差异，其中CD98，fascin，LAMC2，PIGR／SC，14-3-3 sigma，14-3-3 beta，14-3-3 eta在不同组之间都有统计学差异。通过CD98，fascin，PIGR／SC，and 14-3-3 eta组合指标，对肺癌病人判别的敏感性和特异性均高于任何一个单独蛋白。另外，ELISA结果同时证明了在体外培养条件下，由条件培养基中鉴定出的蛋白质同样也可以在人的血浆中检测得

论文目录:

中文摘要

英文摘要

英文缩写对照表

前言

材料和方法

1. 实验材料

2. 实验方法

结果

1. 条件培养基中鉴定的游离蛋白

2. Western blotting结果

3. ELISA结果

4. 免疫组化结果

讨论

结论

参考文献

论文综述

条件培养基鉴定蛋白附表

致谢

研究生期间参与的工作

声明

发布时间: 2006-10-13

参考文献

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一种研究血液中肺癌相关游离蛋白的新策略

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