论文摘要
肝细胞肝癌在我国的发病率较高,且恶性程度高,是严重影响我国人民健康的恶性肿瘤之一。尽管近半个世纪以来我国在肝癌的临床治疗方面积累了丰富的经验,基础研究方面也取得长足的进步,但远未达到控制该肿瘤的程度;肝癌对常规的放疗、化疗方法不敏感,近年来多倾向于以手术为主的综合治疗,但手术治疗仅对部分早期患者适用,且术后一年生存率仅为39.7%,因此亟需利用现代生物技术探索新的治疗方法。 抗体技术及融合蛋白技术在肿瘤治疗方面不断取得进展,但全人抗体与毒素融合蛋白治疗肝癌的研究国内还未见报道;因此,为了探讨全人重组免疫毒素在肝癌的导向治疗中的作用,本研究采用基因工程技术,将从全人源噬菌体ScFv抗体库中筛选出的抗肝癌单链抗体基因与相思子毒素A链基因重组,构建原核表达载体pBAD/gⅢ-A3/Abrin-A,探索其在大肠杆菌TOP10中的诱导表达情况及表达条件。对诱导产物纯化后,得到抗肝癌免疫毒素A3/Abrin-A,初步确定对人肝癌细胞系BEL-7402的生长抑制作用,从而制备出具有一定临床应用潜能的特异性全人源抗肝癌免疫毒素,为今后肝癌的临床导向治疗研究提供技术贮备。 研究方法 1.根据本课题组从全人源噬菌体ScFv抗体库中筛选出的抗肝癌单链抗体A3基因及GenBank已发表的相思子毒素A链基因序列,分别设计一对引物,为便于克隆和表达,在引物两端引进合适的酶切
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