口腔黏膜下纤维性变癌变的危险因素及以Survivin为靶向的致病机制研究

论文摘要

背景与目的口腔黏膜下纤维性变（oral submucous fibrosis,OSF）是一种具有癌变倾向的口腔黏膜疾病。印度、孟加拉国、巴基斯坦等南亚、东南亚地区及我国湖南、台湾、海南等地为OSF高发区,这与当地居民喜好咀嚼槟榔有关。OSF的癌变率可高达7～13%,且近年来有逐渐上升的趋势。OSF癌变是多因素综合作用的结果,其发病机制目前尚无明确定论。鉴于此,有必要对OSF癌变发病机制作进一步研究。我们首先从流行病学的角度,采用Logistic回归分析探讨OSF癌变的危险因素,为预防和治疗提供依据。接着,选择Survivin及其相关分子为代表,从分子生物学的角度,以细胞凋亡受阻、细胞周期紊乱为切入点来探讨OSF癌变的发病机制,为早期诊断与治疗提供理论依据。方法首先,对病例组42例OSF癌变患者和对照组40例OSF未癌变者进行多因素Logistic回归分析,研究OSF癌变与年龄等13个相关因素之间的数量关系。接着,在10例正常口腔黏膜上皮组织、40例OSF上皮组织（早期10例、中期15例、晚期15例）以及42例OSF癌变组织中,采用免疫组化、RT-PCR及Western blotting先分别检测Survivin的表达,再应用免疫组化及Western blotting检测p-Survivin的表达,然后应用Western blotting分别检测Cyclin B1、p34cdc2和p-p34cdc2的表达。最后,利用免疫共沉淀分析p34cdc2激酶与Survivin的相关性。结果1.Logistic回归结果提示,引入回归方程的4个因素为:年龄、嚼槟榔持续时间、吸烟持续时间、是否合并白斑（oral leukoplakia,OLK）或扁平苔藓（oral lichen planus,OLP）。2.免疫组化及RT-PCR结果表明:正常口腔黏膜上皮中无Survivin阳性表达;OSF组Survivin阳性表达率为47.5%（19/40）,其中早期为30.0%（3/10）,中期为46.7%（7/15）,晚期为60.0%（9/15）;OSF癌变组阳性率高达95.2%（40/42）。Survivin在OSF癌变组中阳性率高于OSF组,差异有统计学意义（P＜0.01）;而OSF早、中、晚期三组间Survivin阳性表达率虽逐渐增高,但其差异并无统计学意义（P＞0.05）。Western blotting证实了上述结果。Survivin mRNA的表达与OSF癌变患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤部位及临床TNM分期均无明显相关。3.免疫组化结果提示:p-Survivin在正常口腔黏膜上皮中无阳性表达;OSF组p-Survivin阳性表达率为50.0%（20/40）,其中早期为30.0%（3/10）,中期为46.7%（7/15）,晚期为66.7%（10/15）;OSF癌变组阳性率高达97.6%（41/42）。OSF癌变组中p-Survivin阳性表达率高于OSF组,差异有统计学意义（P＜0.01）;p-Survivin的表达率在OSF早、中、晚期三组之间相比差异无统计学意义（P＞0.05）。Western blotting结果与免疫组化检测的结果基本吻合。4.Western blotting分析表明:正常口腔黏膜上皮中Cyclin B1表达极弱,未检测到p34cdc2和p-p34cdc2的阳性表达;Cyclin B1、p34cdc2和p-p34cdc2的表达在OSF早、中和晚期组织中表达逐渐增强;OSF癌变组织中Cyclin B1、p34cdc2和p-p34cdc2的表达最强。Cyclin B1、p34cdc2和p-p34cdc2在OSF组中阳性表达高于正常口腔黏膜组,差异有统计学意义（P＜0.05）;而这些G2/M期分子在OSF癌变组中的阳性表达高于OSF组,差异有统计学意义（P＜0.05）;但在OSF早、中、晚期三组之间相比则差异无统计学意义（P＞0.05）。5.免疫共沉淀实验证实了p34cdc2与Survivin的结合。结论1.年龄、嚼槟榔持续时间、吸烟持续时间、是否合并OLK或OLP与OSF癌变密切相关,可能是OSF癌变的危险因素。2.Survivin在OSF及其癌变组织中的过度表达与OSF癌变密切相关。Survivin在其中参与了细胞凋亡的抑制和有丝分裂的干扰,对癌变具有促进作用,这可能是OSF癌变过程中的一个重要分子机制。Survivin对OSF及其癌变的早期诊断和治疗具有重要的临床意义,有望成为诊断标志物及治疗靶。3.细胞周期G2/M期重要激酶p34cdc2-Cyclin B1复合物促进Survivin Thr34位的磷酸化,进一步说明Survivin在OSF癌变中具有功能活性。4.从细胞周期的角度证实了Cyclin B1、p34cdc2在OSF及其癌变组织中的过表达引起的细胞周期G2/M检测点紊乱可能是OSF癌变过程中另一重要的分子机制。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写与注解
• 第一章 口腔黏膜下纤维性变癌变危险因素分析
• 1.1 前言
• 1.2 研究对象
• 1.3 研究方法
• 1.4 结果
• 1.5 分析与讨论
• 1.6 结论
• 第二章 凋亡抑制蛋白Survivin在口腔黏膜下纤维性变癌变中的表达特点及其意义
• 2.1 前言
• 2.2 材料
• 2.3 方法
• 2.4 结果
• 2.5 分析与讨论
• 2.6 结论
• 2/M期紊乱的分子机制研究'>第三章 口腔黏膜下纤维性变癌变中Survivin磷酸化与细胞周期G₂/M期紊乱的分子机制研究
• 3.1 前言
• 3.2 材料
• 3.3 方法
• 3.4 结果
• 3.5 分析与讨论
• 3.6 结论
• 全文主要结论
• 参考文献
• 附表
• 发表的综述一
• 发表的综述二
• 发表的SCI论文一
• 发表的SCI论文二
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果及奖励