论文摘要
本文采用微生物发酵方式让细菌利用水酶法提取油茶油后的工艺水中的有机营养物质,产生碱性蛋白酶,然后与工艺水中的茶皂素一起配合应用到污布洗涤上。通过对微生物的筛选,鉴定,诱变选育和发酵条件的优化,从酶活力和去污力两方面着手,获得一株较好的产碱性蛋白酶的菌株和较佳的培养条件。主要结论如下:从湖南耒阳哲桥镇茶籽油榨油坊内采集的油污样品中分离筛选出一株能耐受茶皂素并产生碱性洗涤用蛋白酶的菌株。其产生碱性蛋白酶酶活力为150U/mL,污布去污值Ri达到18。通过对菌株进行菌落及菌株微观形态鉴定和生理生化鉴定,初步确定其属于芽孢杆菌属。其特征性质接近于枯草芽孢杆菌种。经过紫外诱变选育试验,最佳试验条件为:稀释10-5倍,用液量0.1mL,照射时间为180s。获得的菌株产生碱性蛋白酶酶活力为290U/mL,是诱变前菌株产酶能力的2倍,其污布去污值(Ri)19也相应提高。此株菌命名为STPZ-503。在单因素实验中对碳源,氮源,和工艺用水量,金属离子等条件逐个进行考察优化。发现工艺水,可溶性淀粉,蔗糖,酵母膏,茶粕,Mn2+等6个因素对蛋白酶活性影响较大。发酵产酶条件的优化试验获得的最佳培养条件:36℃,250rpm,初始pH为8-9,接种量在5%时,经过优化酶活从290U/mL提升到310U/mL。在考虑影响因子交互作用的前提下,采用响应方程回归分析,得到液体发酵培养基的最佳组成(1000mL)为:工艺水添加量810mL,酵母膏1.55g,蔗糖1.00g,蒸馏水190mL,起始pH8.5。试验证实该发酵培养条件下酶活力540.68U/mL,是优化前酶活的2倍;去污值为20.21,比优化前去污能力有一定提高。
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