自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的检测

论文摘要

目的:探索自身免疫性患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况。收集bFGF抗体阳性个体的的外周血淋巴细胞,为扩增Fab抗体基因及筛选人源性bFGF抗体准备材料。 方法:对包被bFGF的碳酸盐缓冲液的pH条件、bFGF抗原的用量、封闭条件及酶标板类型等条件进行优化,用间接ELISA法检测自身免疫性疾病患者血清中的抗bFGF抗体。采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫患者的血清中的bFGF自身抗体IgG和IgM进行检测。 结果:最佳的间接ELISA条件:用pH9.8的碳酸盐缓冲液稀释抗原bFGF为0.5×10-3μg/μL包被江苏国产酶标板;0.2%白明胶+1%BSA作为封闭液。采用优化的ELISA条件检测发现某些SLE、RA、慢性肾炎、DM、FOU、ITP病人血清中能检测到高滴度的bFGF自身抗体,其A492值明显高于正常人。从每组患者的阳性平均值可知,阳性个体血清中抗bFGF-IgG、抗bFGF-IgM抗体的平均值高于正常人的平均值的两倍加上标准偏差。SLE、RA、DM病人血清中的抗bFGF的IgG自身抗体的平均值分别为0.194±0.059、0.215±0.104、0.239±0.050,高于正常对照组的平均值0.173±0.02,SLE、RA、DM、ITP病人血清中的抗bFGF-IgM自身抗体的平均值分别为0.206±0.061、0.234±0.117、0.248±0.040、0.225±0.060,高于正常对照的平均值0.182±0.037。某些SLE、RA、慢性肾炎、DM、FOU、ITP病人血清中能检测到高滴度的bFGF自身抗体,其A492值明显高于正常人。从每组患者的阳性平均值可知,阳性个体血清中抗bFGF-IgG、抗bFGF-IgM抗体的平均值高于正常人的平均值的两倍加上标准偏差。 结论:在部分自身免疫性疾病患者体内能够检测到bFGF的自身抗体,对bFGF自身抗体的调查研究将为自身免疫疾病的机制的探讨奠定基础。

论文目录

• 缩略语表
• 摘要
• Abstract
• 第一部分 绪论
• 1.1 天然自身抗体
• 1.2 自身免疫疾病
• 1.3 自身抗体与自身免疫疾病
• 1.4 细胞因子与细胞因子自身抗体在自身免疫疾病发生发展过程中的影响
• 1.5 bFGF与bFGF自身抗体在自身免疫疾病中的作用研究
• 第二部分 材料与方法
• 2.1 实验材料和器材
• 2.1.1 主要材料与试剂
• 2.1.2 仪器
• 2.1.3 主要溶液的配制
• 2.2 方法
• 2.2.1 血清的收集与分离
• 2.2.2 SDS-PAGE检测抗原bFGF的纯度
• 2.2.3 优选间接ELISA检测的封闭液
• 2.2.4 酶标板的优选
• 2.2.5 碳酸盐缓冲液pH值的优选
• 2.2.6 包被抗原浓度的优选
• 2.2.7 自身免疫疾病患者血清样品的ELISA检测
• 2.2.8 bFGF抗体阳性病人的外周血淋巴细胞的收集
• 第三部分 实验结果
• 3.3.1 bFGF抗原的纯度鉴定
• 3.3.2 不同封闭液的封闭效果
• 3.3.3 不同酶标板对ELISA检测结果的影响
• 3.3.4 不同pH值的碳酸盐缓冲液包被抗原对ELISA的影响
• 3.3.5 不同抗原浓度对ELISA检测结果的影响及抗原活性的鉴定
• 3.3.6 自身免疫疾病患者血清中的抗bFGF自身抗体的检测
• 3.3.6.1 365例患者血清中的抗bFGF自身抗体的检测情况
• 3.3.6.2 自身免疫病患者血清中的抗bFGF-IgG、抗bFGF-IgM抗体与正常人的比较
• 3.3.7 bFGF抗体阳性病人的外周血淋巴细胞的收集
• 第四部分 讨论
• 展望
• 参考文献
• 致谢