诱导雌性骨髓干细胞向Stra8+及FSHR+细胞分化的研究

2020-12-02阅读(488)

论文摘要

目的:探索睾丸支持细胞（Sertoli cells, SCs）和雌性骨髓干细胞（female bone marrow stem cells, FBMSCs）的分离和体外培养技术;观察SCs和全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）对FBMSCs生长、增殖的影响;观察SCs和ATRA诱导FBMSCs向FSHR+和Stra8+细胞分化的影响。方法:二步酶消化和Tris-HCl低渗法分离12-16d SD大鼠睾丸SCs,全骨髓贴壁法分离青年雌性SD大鼠FBMSCs;用MTT比色法检测SCs与FBMSCs双室共培养（transwell membrane,孔径0.4μm,允许可溶性分子通过）及ATRA对培养FBMSCs的存活及增殖的影响;为检测FBMSCs诱导分化情况,用RT-PCR检测生殖干细胞由有丝分裂转变为减数分裂前特异表达基因Stra8 mRNA及卵巢颗粒细胞特异表达基因FSHR mRNA在诱导分化的FBMSCs的表达,用免疫细胞化学方法检测FBMSCs、SCs FSHR的表达,Western blot检测FBMSCs分化细胞FSHR蛋白的表达情况。观察睾丸SCs和ATRA诱导贴壁传代培养第二代FBMSCs向Stra8+（Stra8阳性）及FSHR+（FSHR阳性）细胞分化的影响。结果:1. SCs与FBMSCs共培养组（共培养组）和FBMSCs加入ATRA培养组（ATRA组）,共培养组在培养的第1至第5天增殖明显大于对照组（P<0.01）,ATRA组在培养的第一天至第五天增殖都大于对照组,其中第三天、第四天有显著差异（P<0.05）。在第6天至第7天,对照组细胞数量微增,共培养组和ATRA组FBMSCs细胞数量下降,较对照组明显减少（P<0.01）,表现出早期促进增殖、后期增加凋亡的双相作用。2.共培养组和ATRA组培养7天的FBMSCs部分分化成为大小不一、呈圆形或球形的细胞,分化的大而圆形细胞周围有许多小细胞环绕。对照组FBMSCs细胞比较均一呈长梭形。3.免疫细胞化学显示,共培养组培养3、5、7天的FBMSCs部分分化成为中等大小球形或圆形的FSHR阳性细胞,呈簇状分布,随着培养时间延长,细胞体积增大。RT-PCR显示共培养组和ATRA组培养7天的FBMSCs均有Stra8mRNA、FSHR mRNA表达,对照组没有表达;western blot显示共培养组和ATRA组培养7天的FBMSCs均有FSHR蛋白表达,对照组没有表达。表明共培养组和ATRA组培养的FBMSCs均能诱导分化为FSHR+和Stra8+细胞。结论:1. SCs与FBMSCs共培养组和加入ATRA组培养对FBMSCs生长、增殖均具有前期促进增殖后期引起细胞数量下降的双相作用。2. SCs与FBMSCs共培养组和加入ATRA组培养可诱导FBMSCs表达生殖干细胞由有丝分裂转变为减数分裂前特异表达基因Stra8 mRNA,表明FBMSCs中具有能向生殖细胞分化的多能干细胞。3. SCs与FBMSCs共培养组和加入ATRA组培养可诱导FBMSCs表达卵巢颗粒细胞特异表达基因FSHR mRNA和蛋白质,FSHR阳性细胞呈现为中等大小的球形或圆形细胞,呈簇状分布,随着培养时间延长,细胞体积增大,表明FBMSCs中具有能向颗粒细胞样细胞分化的多能干细胞。4. ATRA和SCs均能体外诱导FBMSCs分化为Stra8+及FSHR+细胞,作用相似,推测ATRA可能是SCs分泌的可诱导FBMSCs分化的可溶性因子之一。

论文目录

摘要

ABSTRACT

第1章引言

第2章材料和方法

2.1 材料

2.1.1 主要仪器设备

2.1.2 主要试剂及配置方法

2.1.3 动物

2.2 方法

2.2.1 大鼠睾丸支持细胞的分离纯化及体外培养

2.2.2 大鼠骨髓干细胞的分离和体外培养

2.2.3 睾丸支持细胞及 ATRA 对雌性骨髓干细胞存活、增殖作用的检测

+及FSHR⁺细胞分化标志的测定'>2.2.4 睾丸支持细胞和全反式维甲酸诱导雌性骨髓干细胞向 Stra8⁺及FSHR⁺细胞分化标志的测定

2.2.5 统计分析

第3章结果

3.1 分离培养的雌性骨髓干细胞形态学观察

3.2 睾丸支持细胞对雌性骨髓干细胞存活、增殖的影响

3.3 睾丸支持细胞和全反式维甲酸诱导雌性骨髓干细胞向 Stra8+和 FSHR+细胞分化

3.3.1 诱导分化的雌性骨髓干细胞形态学改变

3.3.2 诱导分化的雌性骨髓干细胞向 Stra8+细胞的分化

+细胞的分化'>3.3.3 诱导分化的雌性骨髓干细胞向 FSHR⁺细胞的分化

第4章讨论

第5章结论

致谢

参考文献

附录A 附图

附录B 综述

攻读学位期间的研究成果

相关论文文献

[1].槟榔江水牛FSHR基因分离鉴定及其功能初步分析[J]. 云南农业大学学报(自然科学) 2018(06)
[2].牦牛FSHR基因克隆及其在生殖轴中的表达研究[J]. 中国畜牧兽医 2019(02)
[3].绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达[J]. 中国兽医学报 2019(08)
[4].香猪FSHR基因外显子10的多态性及其与产仔数间的关联分析[J]. 中国畜牧兽医 2017(03)
[5].绵羊FSHR基因生物信息学分析及其器官表达规律研究[J]. 黑龙江畜牧兽医 2019(03)
[6].京海黄鸡FSHR基因组织表达谱及表达规律的研究[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2019(03)
[7].绵羊FSHR基因可变剪接体的克隆、鉴定及表达分析[J]. 江苏农业学报 2017(03)
[8].雷州黄牛促卵泡素受体基因(FSHR)的多态性分析[J]. 广东畜牧兽医科技 2008(03)
[9].FSHR在不同羊品种中的研究进展[J]. 安徽农学通报 2008(20)
[10].卵泡刺激素受体FSHR234纳米抗体的分离纯化及多克隆抗体的制备[J]. 微生物学通报 2018(11)
[11].鸡FSHR重组蛋白的异源表达及纯化制备[J]. 畜牧兽医科技信息 2017(07)
[12].牦牛FSHR基因5′端部分序列克隆及生物信息学分析[J]. 家畜生态学报 2014(01)
[13].鸡FSHR基因研究进展[J]. 畜牧兽医科技信息 2014(06)
[14].卵泡刺激素受体(FSHR_(32-44))肽疫苗对雄性小鼠生殖器官影响[J]. 免疫学杂志 2012(09)
[15].北极狐FSHR基因多态性与产仔数关联分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2014(11)
[16].黄牛FSHR基因的生物信息学分析[J]. 甘肃农业大学学报 2012(04)
[17].山羊FSHR基因编码蛋白的结构及功能分析[J]. 河南农业科学 2017(07)
[18].FSHR基因多态性与绝经后骨质疏松症的关联性分析[J]. 中国骨质疏松杂志 2020(11)
[19].转录因子PAX4调控湖羊FSHR基因转录活性[J]. 畜牧兽医学报 2018(05)
[20].湖羊和巴什拜羊FSHR基因多态性分析[J]. 畜牧与兽医 2017(05)
[21].牛FSHR基因第4外显子多态性检测及序列分析[J]. 中国兽医学报 2011(03)
[22].水牛促卵泡素受体(FSHR)基因启动子克隆、生物信息学分析及转录活性检测[J]. 中国畜牧兽医 2015(11)
[23].贵州地方山羊FSHR基因与繁殖性状的相关性研究[J]. 农业生物技术学报 2017(01)
[24].FSHR基因多态性与卵巢早衰和多囊卵巢综合征的关系[J]. 广东医学 2016(01)
[25].无量山乌骨鸡FSHR基因分离、表达及其蛋白功能分析[J]. 云南农业大学学报(自然科学) 2018(05)
[26].小尾寒羊FSHR基因在生殖轴的表达研究[J]. 中国草食动物科学 2018(06)
[27].卵泡刺激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布[J]. 中国兽医学报 2017(05)
[28].日粮不同能量水平对绵羊卵巢FSHR基因表达的影响[J]. 河北农业大学学报 2012(01)
[29].卵泡刺激素受体(FSHR)胞外区B细胞表位的优化筛选[J]. 中国妇幼保健 2012(29)
[30].德国牧羊犬FSHR基因第1外显子的克隆与序列分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2014(15)

标签：支持细胞论文; 全反式维甲酸论文; 雌性骨髓干细胞论文;

诱导雌性骨髓干细胞向Stra8+及FSHR+细胞分化的研究

下载Doc文档

猜你喜欢