论文摘要
目的:设计针对PAI基因的特异性siRNA,分别转染HASMC和HepG2细胞,以下调PAI基因的表达,并筛选出PAI基因沉默的HASMC和HepG2细胞。同时,建立大鼠腹主动脉血栓形成模型,观察并检测给予tPA和PAIsiRNA后造模大鼠血栓形成及相关指标的变化情况,为进一步研究PAI基因在血栓性疾病中的作用机制提供了理论基础和实验研究平台。方法:一、设计针对PAI基因的特异性siRNA,将之转染HASMC,以下调PAI基因的表达,并检测PAI及tPA基因在HASMC中的表达情况。二、构建PAI siRNA真核表达载体,转染HepG2细胞,检测PAI及VEGF基因在HepG2细胞中的表达情况。三、建立大鼠腹主动脉血栓形成模型,并检测给予tPA及PAI siRNA后,造模大鼠血栓出现率、血栓长度、出凝血时间、血浆纤维蛋白原含量以及PAI活性的变化情况。结果:PAI siRNA能特异性降低PAI mRNA及PAI蛋白的表达水平,同时检测到在HASMC中tPA蛋白的表达水平升高,而在HepG2细胞中VEGF蛋白的表达水平则下降。动物实验表明,给予PAI siRNA后,PAI基因的表达水平被特异性下调,tPA和PAI之间的动态平衡被打破,致使tPA表达水平升高,导致纤溶活性增强。实验组血栓出现率及血栓长度明显降低,血浆纤维蛋白原含量及PAI活性亦明显下降,而出、凝血时间则明显延长。结论:PAI siRNA转染HASMC和HepG2细胞后,能够在mRNA及蛋白水平上特异性下调PAI基因的表达,同时筛选出PAI基因沉默的HASMC和HepG2细胞,为进一步研究PAI基因在血栓性疾病中的作用机制提供了理论基础和实验研究平台。