论文摘要
自然流产是妇科常见病之一,不仅损害妇女的身心健康,甚至还可能会引发一系列家庭问题,而给社会带来不稳定因素。所以寻找一种防止流产的有效方法具有积极的临床意义和社会意义。 1.文献研究 目前大多数学者将Th1/Th2型细胞因子介导的免疫反应描述为Th1型免疫反应和Th2型免疫反应。细胞因子在病理妊娠丢失中有着重要作用。Th1细胞因子对妊娠有害,而Th2细胞因子却对维持妊娠起着积极作用。两者之间的平衡对维持正常妊娠起着重要的作用。平衡被打破,将导致疾病如自然流产的发生。 妊娠早期蜕膜中含大量淋巴细胞,γδT细胞数量较非妊娠期增加1倍。γδT细胞可根据不同的病原体刺激产生不同的细胞因子,进而影响Th1和Th2细胞的分化成熟,从而参与免疫调节。γδT细胞的许多生物学特点仍处于被探索阶段,但人们已发现γδT细胞的特性既与Th相似即分泌多种细胞因子,又与CTL相似即对多种细胞表现出细胞毒活性。已有资料显示TCRγδT细胞具有识别绒毛滋养细胞表达的人类白细胞抗原,参与调节Th1/Th2型细胞因子的平衡偏移,对母胎免疫的调节起着重要作用。 2.临床研究:母胎界面Th1/Th2细胞因子平衡与肾虚自然流产相关性的研究 所有病例均来源于2005年3月至2005年12月在广州中医药大学第一附属医院妇科门诊和住院部就诊的妇科病人。所有受试病例必须按照诊断标准、纳入标准和排除标准进行筛选。选择肾虚型早期自然流产的孕妇10例为实验组,正常早期妊娠的孕妇要求人工流产者10例为对照组。采用半定量RT-PCR检测蜕膜组织Th1型(IL-2、IFN-γ)/Th2型(IL-4、IL-10)细胞因子mRNA表达。 本研究再次证实妊娠期Th1/Th2细胞因子的平衡偏移与SA发生具有相关性,结果提示肾虚型自然流产患者母胎界面细胞因子Th1(IL-2、IFN-γ)/Th2(IL-10、IL-4)平衡失调可能是自然流产肾虚证的本质之一。本研究进一步为“肾主生殖”理论提供了科学依据,同时亦为健脾补肾法治疗该病提供了科学根据。
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引言第一部 分文献研究1.母胎界面细胞因子的研究进展1.1 母胎界面的细胞因子的免疫作用1.1.1 IL-21.1.2 IL-41.1.3 IL-61.1.4 IL-101.1.5 TNF-α1.1.6 IFN-γ1.2 Th1/Th2型母胎界面细胞因子的协调对妊娠维持的作用1.3 母胎界面细胞因子网络平衡与流产的临床研究1.4 母胎界面细胞因子网络平衡与流产的实验研究2.中药对细胞因子网络失衡调整的研究3.γδT细胞研究进展3.1 γδT细胞的功能3.2 γδT细胞与自然流产4.参考文献第二部分 临床研究 母胎界面Th1/Th2细胞因子平衡与肾虚自然流产相关性的研究1.病例来源2.病例选择3.诊断标准3.1 西医诊断标准.3.1.1 早期自然流产诊断标准3.1.2 正常早期妊娠诊断标准3.2 中医辨证标准3.3 纳入标准3.4 排除标准4.一般资料5.实验方法5.1 主要仪器与设备5.2 主要试剂5.3 引物的设计与合成5.4 指标检测步骤5.4.1 总RNA抽提5.4.2 cDNA的合成5.4.3 PCR扩增5.4.4 DNA扩增产物分析6.统计学方法7.结果7.1 蜕膜组织Th2(IL-10、IL-4)、Th1(IL-2、IFN-γ)相对含量比较(%)7.2 蜕膜组织Th2(IL-10、IL-4)/Th1(IL-2、IFN-γ)相对含量比值比较8.讨论8.1 肾主生殖的理论源流8.1.1 肾的生理功能8.1.2 肾主生殖的理论源流8.2 肾主生殖的现代研究进展8.2.1 肾与下丘脑—垂体—卵巢轴8.2.2 肾与神经-内分泌-免疫网络8.2.2.1 肾与免疫调节系统8.2.2.2 肾与肾上腺调节轴8.2.2.3 肾与神经递质及神经肽的调节8.3 自然流产病因和发病机制研究8.3.1 遗传因素8.3.2 子宫因素8.3.3 生殖道感染因素8.3.4 内分泌因素8.3.5 免疫因素8.3.5.1 抗原、抗体系统异常8.3.5.2 Th1/Th2型细胞因子失衡8.3.6 生活环境因素8.3.7 父母双方的其它因素8.4 母胎界面Th1/Th2型细胞因子与妊娠8.4.1 Th1/Th2型母胎界面细胞因子的协调对妊娠维持的作用8.4.2 母胎界面细胞因子网络平衡与流产的临床研究8.4.3 母胎界面细胞因子网络平衡与流产的实验研究8.5 肾虚自然流产与母胎界面细胞因子网络平衡的关系9.参考文献第三部分 实验研究第一节 助孕3号方对肾虚黄体抑制流产大鼠母胎界面Th1/Th2细胞因子的影响研究1.材料与方法1.1 实验动物1.2 实验药物1.3 实验方法及步骤2.观测指标3.主要仪器、设备及主要试剂4.引物的设计与合成5.指标检测步骤6.统计学方法7.结果7.1 各组妊娠大鼠一般情况7.2 造模前后的体重变化7.2.1 各组大鼠体重造模前后自身比较7.2.2 各组大鼠体重造模后组间比较7.2.3 各组大鼠体重造模前后体重差组间比较7.3 各组大鼠子宫重量、胚胎数及流产情况比较7.3.1 各组孕鼠子宫重量比较7.3.2 各组孕鼠平均胚胎数比较7.3.3 各组孕鼠平均流产率比较7.4 蜕膜组织Th2(IL-10、IL-4)、Th1(IL-2、IFN-γ)相对含量比较(%)7.4.1 各组孕鼠蜕膜组织IL-10相对含量比较(%)7.4.2 各组孕鼠蜕膜组织IL-4相对含量比较(%)7.4.3 各组孕鼠蜕膜组织IL-2相对含量比较(%)7.4.4 各组孕鼠蜕膜组织IFN-γ相对含量比较(%)7.5 蜕膜组织Th2(IL-10、IL-4)/Thl(IL-2、IFN-γ)相对含量比值比较8.讨论8.1 肾虚黄体抑制病证结合动物流产模型的建立8.2 中药对Th1/Th2型细胞因子网络失衡调整的研究8.3 肾虚流产大鼠母胎界面Th1、Th2型细胞因子变化及助孕3号方的治疗作用9.参考文献第二节 助孕3号方对肾虚黄体抑制流产大鼠外周血中Th1/Th2细胞因子的影响研究1.材料与方法1.1 实验动物及造模方法1.2 取血方法1.3 主要仪器及试剂2.细胞因子检测原理2.1 ELISA细胞因子检测原理2.2 ELISA细胞因子检测方法3.统计处理4.实验结果4.1 各组大鼠血清中Th2(IL-10、IL-4)、Th1(IL-2、IFN-γ)含量比较4.1.1 各组孕鼠间外周血IL-10表达水平比较4.1.2 各组孕鼠间外周血IL-4表达水平比较4.1.3 各组孕鼠间外周血IL-2表达水平比较4.1.4 各组孕鼠间外周血IFN-γ表达水平比较4.2 Th2(IL-10、IL-4)/Th1(IL-2、IFN-γ)比值比较5.讨论5.1 助孕3号方防治流产机理的探讨5.2 肾虚流产大鼠外周血中Th1、Th2型细胞因子的变化及补肾健脾法的治疗作用6.参考文献第三节 助孕3号方对肾虚黄体抑制流产大鼠TCRγδT细胞影响的研究1.材料与方法1.1 实验动物及造模方法1.2 取血方法1.3 TCRγδT检测方法1.3.1 主要试剂1.3.2 主要仪器1.3.3 γδT检测步骤1.3.4 流式细胞术检测及分析2.统计处理3.结果3.1 各组外周血中CD3T细胞比较3.2 各组外周血中TCRγδT细胞比较3.3 各组外周血中TCRγδT细胞/CD3T细胞比较4.讨论4.1 TCRγδT淋巴细胞在妊娠中的免疫调节作用4.2 助孕3号方治疗肾虚黄体抑制流产孕鼠的治疗机制5.参考文献第四节 小结第四部分 结论中英文缩略对照致谢
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肾虚自然流产蜕膜Th1/Th2表达及助孕3号方对流产大鼠TCRγδT和细胞因子调控的研究
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