鲍鱼内脏多糖的提取及其活性研究

论文摘要

鲍鱼是一种珍贵的海产经济动物,其营养和药用价值早为世人认可。但是,在加工过程中,大量的鲍鱼内脏常被丢弃,造成经济损失和环境污染,为提高鲍鱼内脏的利用价值,本文从鲍鱼内脏中提取多糖,考察其生物活性,为鲍鱼内脏的深加工和综合开发奠定一定的理论和技术基础。胃蛋白酶是适于鲍鱼内脏粗多糖脱蛋白用的最佳蛋白水解酶,雌、雄性内脏多糖最适酶加量分别为2000 U/g和4000 U/g。体外抗氧化实验表明,鲍鱼内脏粗多糖（CAVP）经胃蛋白酶处理后,具有较高的羟自由基清除能力,而且强于Vc,但还原能力和络合能力相对较弱。鲍鱼内脏粗多糖经不同蛋白酶处理后,其多糖和蛋白含量同抗氧化活性间没有明显相关性。雌、雄鲍鱼内脏粗多糖与其经胃蛋白酶解、Sephadex G-100凝胶柱分离后所得两个沈脱峰（AVPⅠ和AVPⅡ）之间的体外抗氧化活性具有相似的规律,即清除羟自由基能力顺序为:AVP＞AVPⅡ＞AVPⅠ;还原能力顺序为:AVPⅡ＞AVP＞AVPⅠ;AVPⅠ和AVPⅡ的络合能力则未检测出来。AVPⅠ和AVPⅡ的多糖含量分别为66.41%和51.84%,蛋白含量为1.70%和15.55%,分子量为272 kD和6 kD;两者的单糖组成相同,但各种单糖的相对含量不同,AVPⅠ中鼠李糖:葡萄糖:木糖:甘露糖:半乳糖:岩藻糖的比例为1:2.15:4.00:5.36:33.18:45.14,而AVPⅡ中上述多糖的比例则为1:1.46:1.33:4.98:16.08:12.51。AVPⅠ和AVPⅡ对Hela细胞和K562细胞具有一定的体外抑制作用,但抑制率不高。体外和体内实验结果显示,AVPⅠ和AVPⅡ对正常鼠和环磷酰胺造成的免疫低下鼠显示出明确的免疫增强功能。可以显著增强正常鼠和免疫低下鼠的脾脏、胸腺指数,淋巴细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞吞噬功能和自然杀伤细胞杀伤活性;增加小鼠血清溶血抗体的产生。也可提高小鼠体内IL-2的生成,但效果不显著。研究结果表明,鲍鱼内脏多糖能够提高正常和免疫低下机体的免疫能力。这为今后鲍鱼内脏的综合加工利用奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 概述
• 1.2 动物多糖的分离纯化
• 1.3 多糖的生物活性
• 1.3.1 多糖的抗氧化活性
• 1.3.2 多糖的抗肿瘤活性
• 1.3.3 多糖的免疫调节活性
• 1.3.4 多糖的抗凝血活性
• 1.3.5 多糖的降血糖、降血脂活性
• 1.3.6 多糖的抗病毒作用
• 1.4 海洋贝类多糖的研究进展
• 1.5 研究内容和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 实验原料
• 2.1.2 实验动物及细胞
• 2.1.3 酶制剂
• 2.1.4 药品与试剂
• 2.1.5 主要仪器与设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 基本组分测定及分离纯化
• 2.2.1.1 水分含量的测定
• 2.2.1.2 总蛋白含量的测定
• 2.2.1.3 脂肪含量的测定
• 2.2.1.4 还原糖含量的测定
• 2.2.1.5 总糖含量的测定
• 2.2.1.6 苯酚—硫酸法
• 2.2.1.7 蛋白含量测定
• 2.2.2 鲍鱼内脏粗多糖的抗氧化活性研究
• 2.2.2.1 提取鲍鱼内脏粗多糖
• 2.2.2.2 鲍鱼内脏粗多糖的脱蛋白方式的研究
• 2.2.2.3 鲍鱼内脏多糖的还原能力
• 2.2.2.4 鲍鱼内脏多糖的清除羟自由基能力
• 2.2.2.5 鲍鱼内脏多糖的络合能力
• 2.2.3 鲍鱼内脏多糖的分离纯化及结构初探
• 2.2.3.1 鲍鱼内脏多糖的分离纯化
• 2.2.3.2 测定多糖分子量
• 2.2.3.3 多糖的单糖组成分析
• 2.2.4 鲍鱼内脏多糖的体外抗肿瘤活性
• 2.2.5 鲍鱼内脏多糖的体内及体外免疫增强活性的测定
• 2.2.5.1 实验动物分组及处理
• 2.2.5.2 小鼠脾脏指数和胸腺指数
• 2.2.5.3 小鼠脾淋巴细胞的制备
• 2.2.5.4 鲍鱼内脏多糖对小鼠淋巴细胞增殖的影响
• 2.2.5.5 鲍鱼内脏多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
• 2.2.5.6 鲍鱼内脏多糖对小鼠NK细胞活性的影响
• 2.2.5.7 小鼠体内血清溶血抗体检测
• 2.2.5.8 小鼠体内IL-2的检测
• 2.3 统计学方法
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 鲍鱼内脏粗多糖基本组成
• 3.1.1 标准曲线的绘制
• 3.1.2 鲍鱼内脏基本组成和粗多糖的分离提取
• 3.2 鲍鱼内脏粗多糖体外抗氧化活性的研究
• 3.2.1 蛋白酶水解对多糖和蛋白含量的影响
• 3.2.2 鲍鱼内脏粗多糖的还原能力
• 3.2.3 鲍鱼内脏粗多糖的清除羟自由基能力
• 3.2.4 鲍鱼内脏粗多糖的络合金属离子能力
• 3.2.5 多糖和蛋白含量对鲍鱼内脏粗多糖抗氧化能力的影响
• 3.3 鲍鱼内脏粗多糖的分离纯化及结构初探
• 3.3.1 鲍鱼内脏粗多糖的分离纯化
• 3.3.2 鲍鱼内脏多糖的分子量测定
• 3.3.3 鲍鱼内脏多糖的主要成分及单糖组成
• 3.4 鲍鱼内脏多糖的体外抗氧化活性
• 3.5 鲍鱼内脏多糖体外抗肿瘤活性的研究
• 3.6 鲍鱼内脏多糖免疫增强活性的研究
• 3.6.1 鲍鱼内脏多糖对小鼠脾脏指数和胸腺指数的影响
• 3.6.2 鲍鱼内脏多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响
• 3.6.3 鲍鱼内脏多糖对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
• 3.6.4 鲍鱼内脏多糖对小鼠NK活性的影响
• 3.6.5 鲍鱼内脏多糖对小鼠抗体分泌能力的影响
• 3.6.6 鲍鱼内脏多糖对小鼠体内IL-2的影响
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A 主要缩略语
• 附录B 实验方案
• 附录C 工作及论文情况