胰岛细胞和骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

论文摘要

目的：探讨骨髓间充质干细胞在胰岛移植中对胰岛移植物的潜在保护作用。方法：选取4周龄SD大鼠作为供体,密度梯度离心法分离间充质干细胞,胶原酶消化法分离胰岛细胞,链脲佐菌素制备糖尿病模型SD大鼠,将成模大鼠分为：A组（胰岛细胞联合骨髓间充质干细胞移植组）10只,B组（单纯胰岛细胞移植组）10只,均经门静脉注射途径注入肝脏,另外设C组（对照组）10只,仅经门静脉注入等量生理盐水。利用密度梯度离心法分离间充质干细胞；大鼠胰岛细胞的分离和培养,利用胶原酶消化法分离胰岛细胞,大鼠糖尿病模型的建立,SD大鼠,禁食过夜后腹腔注射2%链脲佐菌素60mg/kg,连续2次血糖测定超过16.5mmol/L并稳定2-3天提示造模成功；间充质干细胞和胰岛细胞联合移植以及胰岛细胞单独移植,并比较各组大鼠血糖改善情况,胰岛素分泌水平,以及胰腺组织形态学变化。结果：1.体外培养MSCs的形态特征经密度梯度离心的MSCs形态比较均一。刚接种时呈悬浮生长,第二天大部已经贴壁,形态以圆形为主,可见不规则,三角形,多角形等形状。随着培养时间的延长悬浮的圆形细胞明显减少,贴壁的细胞开始分裂增殖,呈梭形,纺锤形,巢状生长,七天后细胞融合成单层,成旋涡状排列。传到2,3代后细胞形态变得均一,可有散在生长也可集落生长。2.胰岛细胞的形态在经过胶原酶消化后的大鼠胰腺组织的悬液置于倒置显微镜下观察,见大小不同,圆形或卵圆形的淡棕黄色细胞团和散在细胞,用双硫腙染色后成红色或者猩红色的细胞团为典型的胰岛,在显微镜下观察,胰岛直径大小不一,胰岛细胞数量不等,外分泌组织不着色。3.成功制备了糖尿病大鼠模型,SD大鼠腹腔注射2%链脲佐菌素60mg/kg,连续2次血糖测定均超过16.5mmol/L并稳定3天以上。4.移植后分别对三组模型大鼠的血糖变化进行了监测,统计了三个时间点的数据,并进行方差分析,结果P<0.05,有统计学意义,其中联合移植组对比单纯胰岛移植组也有显著差异,联合移植组和单纯胰岛细胞移植组比较,血糖水平可长时间维持在正常水平；联合移植组胰岛素分泌水平较其他两组也有显著差异。结论：骨髓间充质干细胞保护了胰岛移植物,延长胰岛细胞移植物的存活时间,MSCs在体外扩增相对容易,且来源丰富,可以为胰岛移植开辟一条新途径。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 正文
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢