论文摘要
背景越来越多的证据表明炎症在冠心病（coronary heart disease, CHD）的发生、发展和预后过程中起很重要的作用。多种炎症因子与冠心病的关系是冠心病研究领域的一个热点,揭示炎症因子与冠心病的关系有重要临床意义。多种炎症因子（如C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、白介素-6等）在冠心病中都有不同程度的合成增加。肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor–α, TNF-α）通过增加内皮细胞的促凝活性,促进由活化白细胞介导的内皮细胞的病理损伤和功能改变,引起炎症及损伤;从而引起斑块的稳定性下降、斑块破裂,导致急性冠脉综合征（acute coronary syndrome, ACS）的发生。血管内血栓形成是很多疾病共同的病理过程,它涉及了凝血与抗凝系统、纤溶系统间的动态平衡。组织因子途径在生理性止血与病理性血栓形成过程中具有极其重要的意义。组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor, TFPI）是体内的主要抗凝物质,分为组织因子途径抑制物-1 （TFPI-1）和组织因子途径抑制物-2 （TFPI-2）。本试验即是探讨炎症因子TNF-α对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）表达组织因子途径抑制物-2的影响及其通路。目的观察TNF-α（20ng/mL）、ERK抑制剂PD98059 （10umol/L）、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC） （50umol/L）处理后,人脐静脉内皮细胞TFPI-2表达的变化,探讨TNF-α对内皮细胞对TFPI-2的合成和表达的调节机制,进而探讨其通路。方法（1）体外培养人脐静脉内皮细胞:人原代脐静脉内皮细胞（HUVEC）及低血清培养基购自美国Cascade Biologics公司。细胞复苏后于37℃、5%CO2培养箱中静置培养,经传代,冻存,所用细胞为3-4代。（2）人脐静脉内皮细胞分为单纯培养基对照组、TNF-α组、PD组、PDTC组。TFPI-2蛋白测定采用Western blot法,TFPI-2 mRNA测定采用real time RT-PCR法。结果（1）TNF-α可显著上调TFPI-2蛋白的含量（P<0.01）,ERK抑制剂PD、NF-κB抑制剂PDTC可使TFPI-2蛋白含量降低（P<0.05）。（2）TNF-α可显著上调TFPI-2 mRNA的表达（P<0.01）,ERK抑制剂PD、NF-κB抑制剂PDTC抑制TFPI-2 mRNA合成（P<0.05）。结论（1）TNF-α可以明显上调TFPI-2的表达,对炎症刺激促进血栓形成有一定的保护作用;（2）ERK抑制剂PD及NF-κB抑制剂PDTC均抑制TFPI-2合成,证实MAPK信号转导途径（ERK）及核转录因子NF-κB对TFPI-2的正向调节作用;（3）激活ERK途径、激活核转录因子NF-κB可能是TNF-α实现对TFPI-2的上调作用的重要途径之一。
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