罗勒多糖抗卵巢癌细胞侵袭转移的体外实验研究

论文摘要

目的:探讨罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移作用的可能机制,为临床上寻找有效的抗卵巢癌转移药物与方案提供理论依据。方法:罗勒多糖分别在常氧（21%O2、5%CO2）和乏氧（1%O2、5%CO2和94%N2）环境中作用于人卵巢癌SKOV3细胞,形态学观察不同氧环境下各组细胞形态差异;细胞凋亡-Hoechst 33258染色检测药物对人卵巢癌细胞凋亡情况的影响;MTT法检测各组细胞增殖能力的变化;RT-PCR技术检测骨桥蛋白（osteopontin,OPN）的mRNA表达水平;免疫细胞化学法观察各组细胞胞内OPN表达情况;明胶酶谱法分析各组细胞分泌的MMP-2活性差异;Transwell小室实验检测各组细胞侵袭运动能力。结果:与对照组相比,乏氧环境下罗勒多糖能够促进人卵巢癌细胞SKOV3凋亡,抑制SKOV3细胞的增殖,而常氧环境下罗勒多糖作用相反;另外罗勒多糖在常氧和乏氧环境下都能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞中OPN的表达（转录水平,蛋白水平）,抑制细胞中MMP-2的分泌,降低SKOV3细胞的侵袭运动能力,并且在乏氧环境下罗勒多糖的这些作用更为明显。结论:罗勒多糖具有抗卵巢癌转移的作用,其作用机理与降低骨桥蛋白表达、抑制基质金属蛋白酶-2的分泌、降低卵巢癌细胞侵袭运动能力有关;氧环境可影响其抗肿瘤转移活性。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 实验研究
• 第一部分 罗勒多糖对人卵巢癌SKOV3 细胞生物学行为的影响
• 一、实验技术路线
• 二、实验材料
• （一） 细胞株
• （二） 样品与试剂
• （三） 主要仪器与设备
• 三、实验方法
• （一） 细胞培养基的配制
• （二） 样品及对照品的配制
• （三） 细胞培养
• （四） 形态学观察
• （五） 细胞凋亡-HOECHST 33258 染色
• （六） MTT 抗增殖实验
• （七） 统计分析
• 四、实验结果
• （一） 形态学观察不同氧环境下药物对人卵巢癌SKOV3 细胞形态的影响
• （二） 细胞凋亡-HOECHST33258 染色检测不同氧环境下药物对人卵巢癌SKOV3 细胞凋亡的影响
• （三） MTT 法检测不同氧环境下药物对人卵巢癌SKOV3 细胞增殖情况的影响
• 五、小结
• 第二部分 罗勒多糖对人卵巢癌SKOV3 细胞体外侵袭迁移行为的影响
• 一、实验技术路线
• 二、实验材料
• （一） 细胞株
• （二） 样品与试剂
• （三） 主要仪器与设备
• 三、实验方法
• （一） 细胞培养基的配制：同前
• （二） 样品及对照品的配制
• （三） 细胞培养
• （四） 体外检测罗勒多糖对人卵巢癌SKOV3 细胞中OPN 表达的影响
• （五） 明胶酶谱检测罗勒多糖对人卵巢癌SKOV3 细胞MMP-2 表达水平的影响
• （六） TRANSWELL 小室体外侵袭实验
• （七） 统计分析
• 四、实验结果
• （一） RT-PCR 技术检测OPN MRNA 表达水平
• （二） 免疫细胞化学染色检测胞内OPN 表达情况
• （三） 明胶酶谱分析MMP-2 活性
• （四） TRANSWELL 小室实验检测细胞体外侵袭情况
• 五、小结
• 讨论
• 一、研究概况
• 二、传统医学对肿瘤的认识
• 三、罗勒多糖抗肿瘤侵袭转移的药用分析
• （一） 传统医学对罗勒的认识
• （二） 罗勒多糖抗肿瘤侵袭转移作用的前期实验研究
• 四、罗勒多糖抗卵巢癌侵袭转移的可能机制
• （一） 不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞生长的影响
• （二） 不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞OPN 表达的影响
• （三） 不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞分泌MMP-2 能力的影响
• （四） 不同氧环境下罗勒多糖对肿瘤细胞侵袭与运动能力的影响
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 查新报告